Reaksi penghambatan Rha dan hemaglutinasi (HRA). Reaksi aglutinasi pasif

Daftar isi topik "Imunomodulator. Imunodiagnosis penyakit menular.":

Reaksi aglutinasi pasif. Reaksi aglutinasi tidak langsung. Reaksi hemaglutinasi tidak langsung atau pasif (IRHA, RPHA). Membalikkan RNGA. Reaksi penghambatan hemaglutinasi pasif (PHA).

Ini reaksi disebut tidak langsung (pasif), karena mereka menggunakan Ag (atau AT) yang diserap secara artifisial pada permukaan berbagai partikel sel darah.

Reaksi hemaglutinasi tidak langsung atau pasif (RNGA, RPGA) adalah salah satu reaksi serologis yang paling sensitif. Hal ini didasarkan pada kemampuan AT untuk berinteraksi dengan Ag yang terfiksasi pada berbagai sel darah merah, yang kemudian menggumpal. Untuk stabilitas diagnostik yang lebih baik, sel darah merah diformalkan.

Membalikkan RNGA digunakan untuk mendeteksi Ag dalam serum darah; Untuk tujuan ini, bukan Ag, tetapi AT yang difiksasi pada eritrosit. Reaksi jenis ini banyak digunakan untuk mendiagnosis penyakit menular, menentukan kehamilan, mendeteksi hipersensitivitas terhadap obat, dll.

Reaksi penghambatan hemaglutinasi pasif (RTPGA) - pengembangan lebih lanjut RNGA; dalam arti tertentu mengontrol kekhususannya. Berbeda dengan RNGA, mencakup tiga komponen; Ag, AT dan Ag (AT) teradsorpsi pada eritrosit. Awalnya Ag bereaksi dengan AT (antiserum standar), kemudian eritrosit yang disensitisasi dengan Ag (atau AT) yang sama ditambahkan ke dalam campuran. Jika, ketika Ag berinteraksi dengan AT, tidak ada AT (atau Ag) bebas yang tersisa dalam sistem, maka aglutinasi diagnostik eritrosit tidak diamati.

Daftar isi topik "Imunomodulator. Imunodiagnosis penyakit menular.":

Reaksi aglutinasi terperinci (RA). Untuk menentukan AT dalam serum darah pasien, a reaksi aglutinasi ekstensif (RA). Untuk melakukan ini, diagnostikum ditambahkan ke serangkaian pengenceran serum darah - suspensi mikroorganisme atau partikel yang terbunuh dengan Ag yang diserap. Pemberian pengenceran yang maksimal aglutinasi Ag disebut titer serum.

Jenis reaksi aglutinasi (RA) untuk mendeteksi AT - tes tetes darah untuk tularemia (dengan diagnostik diterapkan pada setetes darah dan munculnya aglutinasi keputihan yang terlihat) dan tes Huddleson untuk brucellosis (dengan diagnostikum diwarnai dengan gentian violet diterapkan pada setetes darah serum).

Perkiraan reaksi aglutinasi (RA)

Untuk mengidentifikasi mikroorganisme yang diisolasi, perkiraan RA ditempatkan pada slide kaca. Untuk melakukan ini, kultur patogen ditambahkan ke setetes antiserum diagnostik standar (diencerkan 1:10, 1:20). Pada hasil positif melakukan reaksi rinci dengan meningkatkan pengenceran antiserum.

Reaksi dianggap positif jika aglutinasi diamati dalam pengenceran mendekati titer serum diagnostik.

OAS. O-Ags somatik stabil terhadap panas dan tahan perebusan selama 2 jam, bila berinteraksi dengan AT membentuk agregat berbutir halus.

Mengomel. N-Ag (flagellata) bersifat termolabil dan cepat terdegradasi pada suhu 100 °C, serta di bawah pengaruh etanol. Dalam reaksi dengan H-antiserum, setelah 2 jam inkubasi, terbentuk serpihan besar yang lepas (dibentuk oleh bakteri yang menempel pada flagela).

Vi-Ar bakteri tifoid relatif stabil terhadap panas (tahan suhu 60-62 °C selama 2 jam); Ketika diinkubasi dengan antiserum Vi, terbentuk aglutinat berbutir halus.

Reaksi hemaglutinasi langsung

Yang paling sederhana reaksi - aglutinasi sel darah merah, atau hemaglutinasi, digunakan untuk menentukan golongan darah dalam sistem ABO. Untuk menentukan aglutinasi(atau kekurangannya) gunakan antisera standar dengan aglutinin anti-A dan anti-B. Reaksi tersebut disebut langsung, karena Ags yang diteliti merupakan komponen alami sel darah merah.

Umum dengan hemaglutinasi langsung hemaglutinasi virus memiliki mekanisme. Banyak virus yang mampu mengaglutinasi eritrosit burung dan mamalia secara spontan; penambahannya pada suspensi eritrosit menyebabkan pembentukan agregat dari virus tersebut.

Reaksi aglutinasi didasarkan pada interaksi suatu reagen (antibodi) dengan antigen yang terletak pada permukaan sel atau partikel asing. Akibatnya, terbentuklah agregat besar yang mengendap dan dapat dilihat bahkan dengan mata telanjang. Dengan cara ini, golongan darah ditentukan menurut sistem ABO, adanya faktor Rh di dalamnya, dll. Ini adalah metode diagnostik yang lebih sensitif dibandingkan dengan reaksi pengendapan, karena volume sedimen (aglutinat) melebihi volume mengendapkan.

Hemaglutinasi langsung

Reaksi hemaglutinasi langsung (DHR) digunakan untuk mendeteksi antigen permukaan mikroorganisme dan sel darah merah, serta antibodi terhadapnya.
Bahan uji (darah) ditambahkan ke serum standar yang mengandung antibodi. Kecepatan reaksi aglutinasi langsung berhubungan dengan jumlah bahan yang diuji, jumlah dan konsentrasi serum, serta suhu lingkungan.

Hemaglutinasi tidak langsung

Reaksi hemaglutinasi tidak langsung dilakukan untuk mendeteksi antibodi dalam darah pasien menggunakan diagnostik eritrosit. Reagennya terdiri dari sel darah merah yang pada permukaannya terdapat antigen (protein mikroorganisme, toksin, alergen, dll).
Serum darah pasien diencerkan dengan larutan natrium klorida 0,9%, kemudian ditambahkan eritrosit diagnostikum dan dipantau hasilnya. Metode diagnostik yang sangat sensitif ini mendeteksi antigen bahkan dalam konsentrasi kecil.

Reaksi penghambatan hemaglutinasi

Reaksi hemaglutinasi

Reaksi aglutinasi

Reaksi aglutinasi (RA) adalah perekatan dan pengendapan mikroba atau sel lain di bawah pengaruh antibodi dengan adanya elektrolit (larutan natrium klorida isotonik). Endapan yang dihasilkan disebut menggumpalkan.

Untuk reaksi yang Anda butuhkan:

1. Antibodi (aglutinin) - ditemukan dalam serum pasien atau serum imun.

2. Antigen - suspensi mikroorganisme hidup atau mati, sel darah merah atau sel lainnya.

3. Larutan isotonik.

Reaksi aglutinasi untuk serodiagnosis banyak digunakan pada demam tifoid, demam paratifoid (reaksi Vidal), brucellosis (reaksi Wright), dll. Antibodinya adalah serum pasien, dan antigennya adalah mikroba yang diketahui.

Saat mengidentifikasi mikroba atau sel lain, suspensinya digunakan sebagai antigen, dan serum imun yang diketahui digunakan sebagai antibodi. Reaksi ini banyak digunakan dalam diagnostik infeksi usus, batuk rejan, dll.

Dalam praktik laboratorium, digunakan dua reaksi hemaglutinasi (HRA) yang berbeda mekanisme kerjanya.

RGB pertama mengacu pada serologis. Dalam reaksi ini, sel darah merah diaglutinasi ketika berinteraksi dengan antibodi yang sesuai (hemaglutinin). Reaksi ini banyak digunakan untuk menentukan golongan darah.

RGB kedua tidak serologis. Di dalamnya, perekatan sel darah merah bukan disebabkan oleh antibodi, melainkan oleh zat khusus yang dibentuk oleh virus. Misalnya, virus influenza mengaglutinasi sel darah merah ayam dan babi guinea, dan virus polio mengaglutinasi sel darah merah domba. Reaksi ini memungkinkan untuk menilai keberadaan virus tertentu dalam bahan yang diteliti.

Ini adalah reaksi serologis di mana antibodi antivirus spesifik, berinteraksi dengan virus (antigen), menetralkannya dan menghilangkan kemampuannya untuk mengaglutinasi sel darah merah, yaitu menghambat reaksi hemaglutinasi. Spesifisitas reaksi penghambatan hemaglutinasi (HAI) yang tinggi memungkinkannya digunakan untuk menentukan jenis bahkan jenis virus yang terdeteksi selama tes HRA.

Reaksi hemaglutinasi tidak langsung (pasif) (IRHA) didasarkan pada fakta bahwa sel darah merah, jika antigen terlarut teradsorpsi pada permukaannya, memperoleh kemampuan untuk mengaglutinasi ketika berinteraksi dengan antibodi terhadap antigen yang teradsorpsi. Diagram RNGA ditunjukkan pada Gambar. RNGA banyak digunakan dalam diagnosis sejumlah infeksi.

Beras. Skema reaksi hemaglutinasi pasif (RPHA). A - mendapatkan diagnostik eritrosit; B - RNGA: 1-eritrosit: 2 - antigen sedang dipelajari; 3 - diagnostik eritrosit; 4 - antibodi terhadap antigen yang diteliti: 5 - menggumpal.

Dengan menggunakan RNGA, antigen yang tidak diketahui dapat ditentukan jika antibodi yang diketahui diserap ke dalam eritrosit.

11621 0

Reaksi serologis ditetapkan sesuai dengan fenomena yang menyertai pembentukan kompleks antigen-antibodi selama interaksi komponen dengan sifat berbeda. Ada reaksi aglutinasi, presipitasi dan lisis.

Reaksi aglutinasi (RA)

Reaksi aglutinasi (RA) didasarkan pada penggunaan antigen sel (suspensi bakteri, eritrosit peka, partikel lateks, dll.) yang berinteraksi dengan antibodi spesifik, sebagai akibatnya kompleks antigen-antibodi yang dihasilkan mengendap. Reaksi ini banyak digunakan dalam praktek laboratorium untuk diagnostik serologis infeksi bakteri dan untuk identifikasi mikroorganisme terisolasi.

RA digunakan untuk mendiagnosis banyak penyakit menular: brucellosis (reaksi Wright, Heddleson), tularemia, leptospirosis (RAL - reaksi aglutinasi dan lisis Leptospira), listeriosis, tifus (RAR - reaksi aglutinasi Rickettsia), shigellosis, yersiniosis, pseudotuberkulosis, dll.

Reaksi aglutinasi tidak langsung atau pasif (RIGA atau RPGA).

Untuk melancarkan reaksi ini, digunakan sel darah merah hewan (domba, monyet, kelinci percobaan, beberapa burung) yang disensitisasi dengan antibodi atau antigen, yang dicapai dengan menginkubasi suspensi sel darah merah dan larutan antigen atau serum imun.

Diagnosticum yang diperoleh berdasarkan eritrosit yang disensitisasi dengan antigen disebut diagnostik antigen eritrosit. Mereka dimaksudkan untuk penentuan antibodi dalam pengenceran serial serum darah, misalnya eritrosit shigella diagnostikums, eritrosit salmonella O-diagnosticums.

Oleh karena itu, diagnosis berdasarkan eritrosit yang disensitisasi dengan imunoglobulin spesifik disebut antibodi(imunoglobulin) diagnostik dan berfungsi untuk mengidentifikasi antigen dalam berbagai bahan, misalnya eritrosit imunoglobulin difteri diagnostikum untuk RIGA, digunakan untuk mendeteksi eksotoksin difteri corynebacteria dalam media nutrisi cair ketika bahan dari hidung dan orofaring diinokulasi ke dalamnya.

Reaksi hemaglutinasi digunakan untuk mendiagnosis infeksi bakteri (demam tifoid, demam paratifoid, disentri, brucellosis, wabah, kolera, dll.) dan infeksi virus (influenza, infeksi adenoviral, campak, dll.). Dari segi sensitivitas dan spesifisitas, RIGA lebih unggul dibandingkan RA.

Reaksi penghambatan hemaglutinasi (HAI)

Reaksi penghambatan hemaglutinasi (HAI) digunakan untuk mentitrasi antibodi antivirus dalam serum darah, serta untuk menentukan jenis kultur virus yang diisolasi. RTGA dapat digunakan untuk mendiagnosisnya infeksi virus, patogen yang memiliki sifat hemaglutinasi.

Prinsip dari metode ini adalah serum yang mengandung antibodi terhadap jenis virus tertentu menekan aktivitas hemaglutinasinya dan sel darah merah tetap tidak diaglutinasi.

Reaksi penghambatan hemaglutinasi pasif (penundaan) (RPHA).

Tiga komponen yang terlibat dalam RTPGA: serum imun, antigen (bahan uji) dan eritrosit yang peka.

Jika bahan uji mengandung antigen yang secara spesifik bereaksi dengan antibodi serum standar imun, kemudian mengikatnya, dan dengan penambahan eritrosit selanjutnya yang disensitisasi dengan antigen yang homolog dengan serum, hemaglutinasi tidak terjadi.

RTPHA digunakan untuk mendeteksi antigen mikroba, untuk penentuan kuantitatifnya, dan juga untuk mengontrol spesifisitas RTPGA.

Reaksi aglutinasi lateks (RLA)

Partikel lateks digunakan sebagai pembawa antibodi (imunoglobulin). RLA merupakan metode cepat untuk mendiagnosis penyakit menular, dengan mempertimbangkan waktu yang dibutuhkan (hingga 10 menit) dan kemampuan mendeteksi antigen dalam sejumlah kecil bahan uji.

RLA digunakan untuk menunjukkan antigen Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae tipe b, Neisseria meningitidis dalam cairan serebrospinal, untuk mendeteksi streptokokus grup A pada usap tenggorokan, untuk mendiagnosis salmonellosis, yersiniosis dan penyakit lainnya. Sensitivitas metode ini adalah 1-10 ng/ml, atau 10³ -10⁶ sel bakteri dalam 1 μl.

Reaksi koaglutinasi (CoA)

Reaksi koaglutinasi (CoA) didasarkan pada kemampuan protein A stafilokokus untuk mengikat imunoglobulin spesifik. RCA - metode diagnostik cepat - berfungsi untuk mengidentifikasi antigen termostabil terlarut dalam sekresi manusia dan dalam komposisi kompleks imun yang bersirkulasi (CIC). Deteksi antigen spesifik dalam komposisi KTK memerlukan pengendapan awal dari serum darah.

reaksi presipitasi

Dalam reaksi presipitasi (RP), sebagai hasil interaksi antibodi dengan antigen larut yang sangat tersebar (protein, polisakarida), kompleks terbentuk dengan partisipasi komplemen - presipitat. Ini adalah tes sensitif yang digunakan untuk mendeteksi dan mengkarakterisasi berbagai antigen dan antibodi. Contoh paling sederhana dari RP berkualitas tinggi adalah pembentukan pita presipitasi buram dalam tabung reaksi pada batas lapisan antigen pada serum imun - reaksi presipitasi cincin. Berbagai jenis RP dalam agar semi cair atau gel agarosa banyak digunakan (metode imunodiffusi ganda, metode imunodifusi radial, imunoelektroforesis).

Reaksi fiksasi komplemen (CFR)

Reaksi fiksasi komplemen (CFR) didasarkan pada fenomena hemolisis yang melibatkan komplemen, yaitu. hanya mampu mendeteksi antibodi pengikat komplemen.

RSC banyak digunakan untuk diagnosis banyak infeksi bakteri dan virus, infeksi riketsia, klamidia, mononukleosis menular, infeksi protozoa, kecacingan. RSC adalah reaksi serologis kompleks yang melibatkan dua sistem: tes (serum darah), diwakili oleh sistem antigen-antibodi dan komplemen, dan hemolitik (sel darah merah domba + serum hemolitik). Serum hemolitik adalah serum darah kelinci yang dilemahkan dengan panas dan diimunisasi dengan eritrosit domba. Ini mengandung antibodi terhadap sel darah merah domba.

Hasil RSC positif - tidak adanya hemolisis - diamati jika serum uji mengandung antibodi yang homolog dengan antigen. Dalam hal ini, kompleks antigen-antibodi yang dihasilkan mengikat komplemen, dan jika tidak ada komplemen bebas, penambahan sistem hemolitik tidak disertai dengan hemolisis. Jika tidak ada antibodi yang sesuai dengan antigen dalam serum, pembentukan kompleks antigen-antibodi tidak terjadi, komplemen tetap bebas dan serum menyebabkan hemolisis sel darah merah, yaitu. adanya hemolisis adalah hasil negatif reaksi.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.