Apa yang ditentukan oleh metode if. Apa arti hasil ELISA positif (enzymatic immunoassay)?

IZIN UMUM FARMAKOPE

Diperkenalkan untuk pertama kalinya

Monografi Farmakope Umum ini mencakup metode enzim immunoassay (ELISA). Metode ELISA adalah metode imunodiagnostik yang sangat sensitif dan sangat spesifik, dengan bantuan penentuan kualitatif dan kuantitatif berbagai zat yang memiliki sifat antigen, hapten (antigen tidak lengkap) atau antibodi dilakukan. Metode ELISA banyak digunakan untuk diagnosis penyakit menular dan tidak menular pada manusia dan hewan dan juga dapat digunakan untuk mengkonfirmasi kualitas pemeriksaan imunobiologis. obat(ILP).

Prinsip metode ini terdiri dari reaksi interaksi spesifik antigen dengan antibodi dengan pembentukan kompleks imun dan deteksi selanjutnya dari kompleks yang dihasilkan menggunakan spektrofotometri, chemiluminescence, dan metode lain yang memadai. Deteksi dapat dilakukan secara langsung (ketika zat uji itu sendiri memiliki aktivitas enzimatik, atau diberi label dengan label enzim), dan tidak langsung atau tidak langsung (ketika zat uji yang terikat pada antibodi yang diimobilisasi pada fase padat diinkubasi dengan antibodi berlabel enzim. ). Analisis kualitatif memungkinkan Anda memperoleh informasi tentang kandungan antigen atau antibodi dalam bahan uji sesuai dengan prinsip “ya/tidak”. Saat melakukan analisis kuantitatif, konsentrasi antigen atau antibodi dalam bahan uji ditentukan menggunakan kurva kalibrasi.

KETENTUAN UMUM

Metode ELISA meliputi 3 tahap utama: 1) pembentukan kompleks imun "antigen (zat uji) - antibodi spesifik untuknya" atau sebaliknya; 2) pembentukan ikatan konjugat dengan kompleks imun yang terbentuk pada tahap sebelumnya atau dengan tempat pengikatan bebas (penentu); 3) transformasi substrat di bawah aksi label enzim menjadi sinyal yang direkam sebagai hasil dari reaksi biokimia.

Semua metode untuk melakukan immunoassay enzim diklasifikasikan sebagai homogen atau heterogen.

Teknik di mana ketiga tahap ELISA berlangsung dalam larutan, dan di antara tahap utama tidak ada langkah tambahan untuk memisahkan kompleks imun yang terbentuk dari komponen yang tidak bereaksi, termasuk dalam kelompok metode ELISA homogen. Dasar ELISA homogen yang biasanya digunakan untuk menentukan zat dengan berat molekul rendah adalah proses penghambatan aktivitas enzim ketika dikombinasikan dengan antigen atau antibodi. Sebagai hasil dari reaksi antigen-antibodi, aktivitas enzim dipulihkan. Ketika kompleks imun antigen-antibodi yang mengandung label enzim terbentuk, aktivitas enzim dihambat sebesar 95% sehubungan dengan substrat dengan berat molekul tinggi, yang disebabkan oleh eksklusi sterik substrat dari pusat aktif enzim. Ketika konsentrasi antigen meningkat, semakin banyak antibodi yang mengikat, dan semakin banyak konjugat antigen-enzim bebas yang dipertahankan yang dapat menghidrolisis substrat dengan berat molekul tinggi. Metode ELISA homogen sangat cepat. Dibutuhkan 1 menit untuk menganalisis satu definisi. Sensitivitas metode ini cukup tinggi. Dengan bantuannya, Anda dapat menentukan zat pada tingkat pikomol.

Untuk metode heterogen, biasanya dilakukan analisis dalam sistem dua fase dengan partisipasi fase padat - pembawa dan tahap pemisahan kompleks imun dari komponen yang tidak bereaksi (pencucian) yang berada dalam fase berbeda (hasil imun kompleks berada dalam fase padat, dan kompleks yang tidak bereaksi berada dalam larutan) adalah wajib. Metode heterogen, di mana pembentukan kompleks imun pada tahap pertama berlangsung pada fase padat, disebut metode fase padat.

Metode diklasifikasikan sebagai homogen-heterogen jika tahap pertama - pembentukan kompleks spesifik - terjadi dalam larutan, dan kemudian fase padat dengan reagen amobil digunakan untuk memisahkan komponen.

Metode ELISA heterogen terdiri dari 3 langkah utama:

• imobilisasi antigen atau antibodi pada fase padat, kompleks yang dihasilkan disebut imunosorben;
• menghapus reagen yang tidak terikat dan memblokir situs pengikatan pada pendukung padat dengan protein penghambat seperti, misalnya, albumin, kasein; inkubasi sediaan yang dianalisis dengan imunosorben agar pengikatannya terjadi;

3) deteksi karena aktivitas enzimatik dari zat uji itu sendiri atau karena label enzimatik yang terkait dengan sediaan yang dianalisis (varian langsung). Dalam beberapa kasus, inkubasi tambahan kompleks "zat uji imunosorben" dengan antibodi sekunder yang terkonjugasi dengan label enzimatik dilakukan (varian tidak langsung).

Penentuan kuantitatif analit dilakukan dengan menambahkan substrat yang cocok untuk detektor yang digunakan dan membandingkan sinyal analit dengan sampel standar.

Metode ELISA heterogen dibagi menjadi ELISA nonkompetitif dan ELISA kompetitif. Skema pengujian dapat dimodifikasi selama pengembangan produk obat sesuai dengan persyaratan yang diperlukan. Perubahan harus ditunjukkan dalam monografi atau dokumentasi normatif. Pemilihan metode ELISA tergantung pada sifat zat uji dan jumlahnya jenis yang berbeda ELISA memiliki sensitivitas yang berbeda. Untuk menilai kualitas zat yang mengandung antibodi, dimungkinkan untuk menggunakan antibodi anti-idiotipik spesifik.

Metode ELISA non-kompetitif

Metode ELISA non-kompetitif dibagi menjadi beberapa jenis sesuai dengan jenis deteksi (kompetitif langsung, kompetitif tidak langsung (tidak langsung)) dan jenis zat yang diimobilisasi pada fase padat (antigen atau antibodi).

ELISA langsung

Bisa dilakukan dengan 2 cara. Dalam kasus pertama, zat uji (antigen) langsung diimobilisasi pada fase padat; maka antibodi berlabel yang terikat pada antigen adalah detektornya. Saat melakukan tes dengan cara yang berbeda, antibodi yang diimobilisasi pada fase padat digunakan. Dalam hal ini, detektor adalah zat uji yang diberi label enzim.

Varian ELISA tidak langsung (tidak langsung).

Saat melakukan varian ELISA tidak langsung, antigen diimobilisasi pada fase padat. Setelah pemblokiran, larutan antibodi spesifik ditambahkan ke antigen. Setelah inkubasi, kompleks antigen-antibodi yang dihasilkan dibersihkan dari antibodi yang tidak terikat dan ditambahkan anti-imunoglobulin (anti-Ig) berlabel enzim, yang bertindak sebagai detektor. Detektor anti-Ig tersedia secara komersial untuk kelas dan subkelas Ig tertentu, membuat format pengujian ini cocok untuk isotipe antibodi. Selain itu, penggunaan anti-Ig berlabel meningkatkan sinyal dibandingkan dengan ELISA langsung, sehingga meningkatkan sensitivitas pengujian.

Metode sandwich sebagai varian dari ELISA

Metode non-kompetitif yang paling umum adalah metode "sandwich". Ketika dilakukan pada fase padat, antibodi primer diimobilisasi dengan pemblokiran berikutnya. Kemudian, zat uji yang mengandung antigen ditambahkan ke dalamnya dan diinkubasi. Setelah inkubasi, kompleks antigen-antibodi dibersihkan dari antigen yang tidak terikat, ditambahkan antibodi sekunder yang diberi label enzim, dan deteksi dilakukan.

Metode ELISA kompetitif

Metode ELISA kompetitif dibagi menjadi beberapa jenis: menurut jenis deteksi (kompetitif langsung, kompetitif tidak langsung (tidak langsung)) dan menurut jenis zat yang diimobilisasi pada fase padat (antigen atau antibodi).

ELISA kompetitif langsung

Untuk mendeteksi atau mengukur antigen terlarut, digunakan ELISA kompetitif langsung dengan antigen yang diimobilisasi pada fase padat. Untuk melakukan ini, gunakan antibodi spesifik antigen yang terkonjugasi dengan detektor yang sesuai (misalnya, peroksidase lobak, alkali fosfatase, ruthenium atau fluorescein). Antigen standar diimobilisasi ke fase padat, diikuti dengan pemblokiran. Antibodi berlabel enzim diinkubasi dengan zat uji (antigen terlarut). Kemudian campuran ini ditambahkan ke antigen yang diimobilisasi, diinkubasi, dan kemudian dicuci dari kompleks antigen-antibodi yang tidak terikat. Langkah selanjutnya adalah menambahkan substrat yang sesuai untuk enzim berlabel. Penghambatan reaksi karena adanya 2 antigen dalam sistem, dibandingkan dengan sampel kontrol tanpa antigen terlarut kompetitif, berbanding terbalik dengan nilai jumlah zat uji.

Melakukan ELISA kompetitif langsung dengan antibodi yang diimobilisasi pada fase padat serupa dengan ELISA kompetitif langsung dengan antigen yang diimobilisasi pada fase padat, tetapi digunakan untuk mendeteksi atau mengukur antibodi.

ELISA kompetitif tidak langsung (tidak langsung).

Metode ELISA ini mirip dengan varian kompetitif langsung, namun, alih-alih antibodi atau antigen berlabel, masing-masing digunakan reagen anti-Ig berlabel atau antibodi sekunder berlabel untuk deteksi.

Kondisi umum untuk metode iniELISA

Berbagai bahan digunakan sebagai fase padat untuk immunoassay enzim: silikon, nitroselulosa, poliamida, polistirena, polivinil klorida, polipropilena, akrilik dan lain-lain. Fase padat dapat berupa dinding tabung reaksi, 96-sumur dan pelat lainnya, bola, manik-manik, serta nitroselulosa dan membran lain yang secara aktif menyerap protein. Prinsip imobilisasi (hidrofobik, hidrofilik, interaksi kovalen) bergantung pada pilihan fase padat. Fasa padat yang paling umum digunakan adalah pelat mikrotiter plastik 96 sumur. Jumlah sumur di piring dapat bervariasi. Pelat bisa transparan (deteksi kolorimetri) dan buram (deteksi chemiluminescent, fluorimetri).

Imobilisasi harus dilakukan tanpa gelembung udara di dalam sumur, karena keberadaannya mengubah pembacaan kerapatan optik. Dimungkinkan untuk menggunakan reagen amobil terbiotinilasi. Dalam hal ini, streptavidin dan label enzim terbiotinilasi digunakan dalam reaksi. Metode ini digunakan untuk memperkuat sinyal. Waktu dan suhu imobilisasi, tergantung pada sifat kinetik, stabilitas dan konsentrasi reagen, harus ditunjukkan dalam monografi dan dokumentasi normatif.

Semua tahap immunoassay enzim, larutan pencuci dan pemblokiran, interval waktu dan kondisi suhu untuk setiap tahap, jumlah putaran per menit untuk inkubasi pada pengocok, kondisi deteksi juga harus ditunjukkan dalam monografi dan dokumentasi peraturan.

Contoh metode untuk beberapa jenis ELISA

Metode ELISA non-kompetitif tidak langsung

1. Penyerapan antigen. 0,1-0,5 µg antigen dan 100 µl larutan buffer karbonat-bikarbonat 0,05 M (pH 9,6) ditambahkan ke setiap sumur dari pelat 96 sumur, kecuali dinyatakan lain dalam monografi atau dokumentasi normatif, dan kemudian diserap pada suhu 4 ° C selama 16 jam Larutan buffer lain dengan nilai pH tinggi dapat digunakan. Inkubasi dilakukan dengan cara digoyangkan pada shaker pelat horizontal.

Pencucian (ganda) molekul antigen yang tidak terikat dilakukan dengan larutan garam buffer fosfat (pH 9,0) yang mengandung 0,1% tween-20 (300 µl per sumur), kecuali dinyatakan lain dalam monografi farmakope atau dokumentasi peraturan.

1. Pemblokiran. Untuk memblokir situs pengikatan antigen atau antibodi non-spesifik, sumur pelat diisi dengan larutan garam buffer fosfat (pH 9,0) atau larutan buffer lain yang ditentukan dalam monografi farmakope atau dalam dokumentasi peraturan yang mengandung larutan 1% albumin serum sapi atau protein lain (kasein, gelatin, susu bubuk, dll.), dan diinkubasi selama 10-15 menit pada suhu kamar (kecuali dinyatakan lain dalam monografi atau dokumentasi normatif).

AKU AKU AKU. Titrasi antibodi spesifik. Jika kuantifikasi diperlukan, zat uji (antigen atau antibodi) dititrasi dalam pengenceran serial secara paralel dengan sampel standar (RS).

Titrasi dapat dilakukan pada baris pelat horizontal dan vertikal. Perlu dicatat bahwa titrasi antibodi dilakukan jika perlu untuk memilih konsentrasi antibodi yang optimal atau menentukan titernya. Jika konsentrasi optimal dan / atau titer antibodi ditentukan, maka pengenceran yang direkomendasikan untuk antibodi ini (serum) digunakan.

Saat titrasi, pengenceran antibodi yang sudah jadi dimasukkan ke dalam sumur pertama dari baris - rata-rata 1–10 μg per sumur, kemudian pengenceran antibodi secara berurutan dilakukan di dalam sumur. Inkubasi dengan antibodi spesifik dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dengan pengocokan pada plate shaker horizontal.

Pencucian dilakukan minimal 3-4 kali menggunakan larutan salin buffer fosfat pH 9,0 yang mengandung 0,1% tween-20.

1. Penambahan antibodi antispesies (antiglobulin) terkonjugasi dengan label enzim. Antibodi poliklonal anti-spesies yang terkonjugasi dengan label enzimatik digunakan sebagai antibodi pendeteksi (sekunder). Paling sering, antibodi kambing atau kelinci digunakan, spesifik untuk seluruh molekul atau untuk fragmen Fc dari antibodi spesifik. Konsentrasi dari detektor antibodi biasanya ditunjukkan oleh pabrikan sebagai pengenceran larutan stok (misalnya, 1:1000).

Inkubasi dengan antibodi berlabel sekunder dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dengan pengocokan pada piring pengocok horizontal.

Pencucian dilakukan minimal 3-4 kali menggunakan larutan garam buffer fosfat (pH 9,0) yang mengandung 0,1% tween-20.

Inkubasi dilakukan selama 10 menit pada suhu ruang dan digoyangkan pada shaker pelat horizontal.

1. 100 μl larutan substrat ditambahkan ke sumur dan diinkubasi selama 10 menit pada suhu kamar dengan pengadukan konstan. Untuk menghentikan reaksi enzimatik, "stop reagen" digunakan, yang ditambahkan ke semua sampel uji dan kontrol dalam jumlah yang sama. Paling sering, asam sulfat digunakan sebagai "reagen penghenti".

Non-kompetitif langsung metode ELISA

Metode ELISA langsung hanya memiliki sedikit perbedaan dengan metode ELISA non-kompetitif tidak langsung. Dengan demikian, tahap I dan II adalah sama pada kedua jenis analisis tersebut. Perbedaannya terletak pada kenyataan bahwa dalam versi langsung ELISA pada tahap III, antibodi spesifik untuk antigen uji digunakan, terkonjugasi dengan label enzim, dan berinteraksi langsung dengan zat uji. Jika perlu, titrasi konjugasi juga dapat dilakukan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan sebelumnya untuk antibodi non-konjugasi. Tahap IV dalam rangka direct noncompetitive ELISA tidak dilakukan.

Metode "sandwich". ELISA

Varian ELISA ini menggunakan sepasang antibodi (primer dan sekunder) khusus untuk epitop antigen yang diteliti secara spasial.

1. Penyerapan antibodi pada fase padat. Metode penyerapan antigen mirip dengan metode penyerapan antibodi pada bagian "ELISA non-kompetitif tidak langsung".
2. Pemblokiran. Teknik untuk memblokir situs pengikatan non-spesifik pada substrat (fase padat) serupa dengan teknik pemblokiran yang dijelaskan di bagian "ELISA non-kompetitif tidak langsung".

AKU AKU AKU. Inkubasi dengan antigen. 50 µl zat uji dan pengenceran standar antigen ditambahkan ke sumur tablet dengan antibodi yang diserap sebelumnya, kecuali dinyatakan lain dalam monografi atau dokumentasi normatif. Pengenceran antigen harus disiapkan dengan saline buffer fosfat (pH 9,0) yang mengandung 0,1% Tween-20, karena Tween-20 mengurangi pengikatan molekul protein non-spesifik satu sama lain dan ke permukaan pelat. Zat uji dan pengenceran antigen standar ditambahkan berpasangan ke sumur yang berdekatan dalam baris horizontal (atau 3 ulangan), menggunakan 2 (3) sumur untuk setiap pengenceran protein.

Inkubasi dilakukan pada suhu kamar selama 30 menit dengan pengadukan konstan. Pencucian dilakukan setidaknya 3-4 kali dengan larutan salin buffer fosfat (pH 9,0) yang mengandung 0,1% tween-20, atau larutan buffer lain yang ditentukan dalam monografi atau dokumentasi peraturan.

1. Inkubasi dengan antibodi berlabel enzim. 100 μl larutan antibodi spesifik yang terkonjugasi dengan label enzim ditambahkan ke sumur tablet. Konsentrasi optimal dari antibodi terkonjugasi, biasanya ditunjukkan dalam monografi atau dokumentasi peraturan (biasanya digunakan konsentrasi 2–4 µg/ml).

Inkubasi dengan antibodi berlabel enzim dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dengan pengocokan di atas piring pengocok horizontal.

Pencucian dilakukan setidaknya 3-4 kali menggunakan larutan salin buffer fosfat (pH 9,0) yang mengandung 0,1% tween-20, atau larutan buffer lain yang ditentukan dalam monografi atau dokumentasi peraturan.

1. Melakukan reaksi enzimatik, disertai dengan munculnya produk berwarna. Prosedur untuk melakukan reaksi enzimatik mirip dengan prosedur yang dijelaskan pada bagian: “Metode ELISA non-kompetitif tidak langsung”.

deteksi

Seperti disebutkan di atas, antibodi yang diberi label dengan label enzim atau reagen lain digunakan untuk deteksi. Label enzim dapat berupa, misalnya, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase atau galactosidase. Antibodi atau antigen dengan label lain dapat digunakan sebagai pendeteksi. Pemilihan reagen pendeteksi bergantung pada jenis label yang terkonjugasi dengan antibodi atau antigen dan metode pendeteksian.

Sebagai metode deteksi, spektrofotometri, chemiluminescence, fluorimetri, dan metode lainnya dapat digunakan, berdasarkan pilihan label.

Hasil metode ELISA kuantitatif

Hasil metode ELISA kuantitatif dihitung dari kurva kalibrasi linier dengan regresi invers atau menggunakan metode kompleks menggunakan kurva kalibrasi nonlinier dengan regresi invers. Metode interpretasi hasil tergantung pada metode yang digunakan untuk pengaturan ELISA. Misalnya, dari hasil pengujian menggunakan kurva kalibrasi, Anda dapat mengevaluasi konsentrasi sampel yang tidak diketahui, mengevaluasi konsentrasi inhibisi setengah maksimal atau konsentrasi efektif. Ini memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah zat uji atau aktivitasnya dibandingkan dengan standar referensi/kalibrasi (RS). Biasanya, bentuk kurva kalibrasi saat melakukan metode ELISA kuantitatif, yang mencirikan konsentrasi obat yang dianalisis, bergantung pada nilai rata-rata yang dihitung secara nonlinier. Dalam hal ini, disarankan untuk menggunakan berbagai model matematika untuk menganalisis kurva yang dihasilkan. Dalam kasus lain, metode ELISA digunakan sebagai metode kualitatif untuk menilai keberadaan zat uji tertentu dalam sampel dalam sensitivitas metode tersebut.

Catatan.

Persiapan larutan buffer karbonat-bikarbonat (pH 9,6). 1,59 g natrium karbonat (anhidrat) atau 4,29 g natrium karbonat 10-air dan 2,93 g natrium bikarbonat ditambahkan ke silinder pengukur dengan kapasitas 1000 ml, dilarutkan dalam 800 ml air murni, pH disesuaikan menjadi 9,6 , diaduk, lalu bawa volume larutan sampai tanda dengan air murni dan campur lagi.

(ELISA) adalah metode pengujian darah di laboratorium, berdasarkan pencarian sel khusus - antibodi berbagai penyakit. Metode ini memungkinkan tidak hanya untuk mengidentifikasi patogen, tetapi juga untuk menentukan pada tahap apa proses patologis itu. Yang terakhir ini sangat penting untuk prognosis dan perawatan lebih lanjut dari pasien.

Kelebihan dan kekurangan metode

Di antara semuanya metode modern ELISA diagnostik adalah yang paling inovatif dan akurat secara teknis. Keuntungan utamanya adalah:

1. Kemampuan untuk mencari semua antibodi yang ada terhadap penyakit menular dalam darah pasien.
2. Ketersediaan metode penelitian yang tinggi. Saat ini, analisis ELISA dapat dilakukan oleh laboratorium berukuran sedang mana pun.
3. Spesifisitas dan sensitivitas metode hampir 100%.
4. Kemampuan mencari antibodi dan antigen, serta pembentukan stadium proses patologis dan melacak dinamikanya, berkat perbandingan kuantitas.

Sejumlah keunggulan dibandingkan tes lain sepenuhnya menutupi satu-satunya kelemahan analisis: ia mampu mendeteksi antibodi, tetapi bukan patogen itu sendiri.

Istilah dasar untuk mengevaluasi analisis

Untuk memahami apa itu analisis ELISA, apa itu dan bagaimana cara melakukannya, Anda perlu mengenal istilah dasar yang digunakan oleh spesialis.

1. Antibodi- protein yang diproduksi oleh sel-sel sistem kekebalan manusia (limfosit tipe B). Mereka merespons dengan reaksi spesifik terhadap konsumsi agen atau zat asing. Nama lain untuk antibodi adalah imunoglobulin, mereka termasuk dalam kelas yang berbeda: A, E, M, G. Mereka berbeda satu sama lain dalam hal massa, kecepatan respons, waktu paruh, dan sejumlah karakteristik lainnya. Biasanya, darah manusia terutama mengandung imunoglobulin kelas G. Jika terjadi infeksi, jumlah imunoglobulin A dan M meningkat tajam. Imunoglobulin E terlibat dalam reaksi alergi.
2. Antigen- agen asing yang berasal dari organik dan berat molekul tinggi. Paling sering itu adalah patogen atau zat aktif biologisnya.
3. Kompleks antigen-antibodi, atau kompleks imun, secara langsung merupakan kombinasi dari zat asing dan imunoglobulin, yang menimbulkan respons imun.

Esensi dan ruang lingkup metode

Pasien sering memiliki pertanyaan: analisis ELISA, apa itu, bagaimana cara melakukannya dan untuk apa? Anda dapat membicarakan metode ini dengan cara yang mudah diakses dengan menjelaskan tahapannya secara singkat.

Tahap persiapan. Dokter lab menggunakan piring khusus dengan 96 sumur. Antigen patogen tertentu diterapkan pada permukaan setiap sumur.

Tahap 1 Darah diambil, yang kemudian dioleskan setetes demi setetes ke sumur. Sumur memulai reaksi antara antigen dan antibodi dalam darah.

Tahap 2 Di dalam sumur, reaksi berjalan lancar dengan pembentukan kompleks imun. Akibatnya, zat dengan warna tertentu terbentuk. Intensitas warna tergantung pada jumlah antibodi dalam darah pasien terhadap setiap patogen tertentu.

Tahap 3 Evaluasi hasil dengan fotometri. Untuk ini, alat khusus yang disebut spektrofotometer digunakan. Ini membandingkan kepadatan material di sumur dan sampel kontrol. Selanjutnya, perangkat menghasilkan hasil dengan analisis matematis.

Evaluasi hasil dan tujuan ELISA

Interpretasi hasil bergantung pada beberapa nuansa penting:

1. Kepadatan optik sumur.
2. Produsen pelat sumur (sistem uji).
3. Laboratorium tempat penelitian dilakukan.

Mengingat nuansa ini, Anda tidak boleh membandingkan dua hasil dari sistem pengujian yang berbeda atau dari laboratorium yang berbeda.

Poin penting lainnya yang memengaruhi analisis ELISA adalah apa yang disebut aviditas antibodi. Parameter ini mencirikan jumlah antigen, kekuatan ikatan pada kompleks antigen-antibodi. Definisinya didasarkan pada pengobatan kompleks imun dengan urea untuk menyelesaikan struktur protein. Ini memungkinkan Anda untuk menghancurkan ikatan lemah antara antigen dan antibodi dan hanya menyisakan ikatan yang kuat. Pentingnya penelitian untuk aviditas terletak pada fakta bahwa penelitian ini dapat digunakan untuk mengetahui durasi infeksi. Informasi ini sangat penting untuk mendiagnosis wanita hamil.

Tes darah ELISA berfungsi untuk:

1. Untuk mencari berbagai antigen patogen.
2. Untuk mempelajari latar belakang hormonal.
3. Untuk menguji adanya penyakit autoimun.
4. Untuk mendeteksi penanda penyakit onkologi.

Varietas ELISA

Analisis ELISA memiliki varietas berikut:

1. Tidak langsung.
2. Lurus.
3. Kompetitif.
4. metode pemblokiran.

Namun pada kenyataannya, hanya metode yang disebut ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) yang digunakan saat ini. Ini didasarkan pada reaksi pembentukan kompleks antigen-antibodi yang dijelaskan di atas dengan perubahan warna pada permukaan sumur.

Tes darah ELISA kuantitatif langsung patut mendapat perhatian khusus. Ini bukan jenis analisis, tetapi cara mengevaluasi hasil. Berkat dia, jumlah antibodi dihitung dan kelasnya ditentukan. Hasilnya tergantung pada kerapatan optik sampel, sistem pengujian tempat ELISA dilakukan, dan juga di laboratorium.

Penyakit yang terdeteksi oleh ELISA

ELISA adalah tes darah yang memungkinkan Anda mengidentifikasi sejumlah besar penyakit menular yang berbeda. Selain itu, penyakit virus dan bakteri terdeteksi dengan akurasi yang sama. Misalnya, dengan bantuan pembentukan kompleks imun, dimungkinkan untuk membuktikan adanya antigen dari agen penyebab penyakit berikut:

Selain itu, ELISA memungkinkan Anda mendeteksi:

1. Penanda kanker - TNF (faktor nekrosis tumor), PSA (antigen spesifik prostat), CEA (antigen kanker-embrionik), CA-125 (penanda tumor ovarium)
2. Hormon kehamilan adalah hCG (human chorionic gonadotropin).
3. Pelanggaran sistem reproduksi: hormon sistem reproduksi wanita dan pria.
4. Patologi kelenjar tiroid.

Penting untuk disebutkan bahwa tes ELISA untuk HIV saat ini adalah cara utama untuk mendiagnosis penyakit berbahaya ini.

Bahan ELISA dan teknik sampling

Untuk melakukan ELISA, darah pasien diambil saat perut kosong. Selanjutnya, serum diperoleh dari darah yang langsung digunakan untuk analisis. Selain itu, ELISA dapat dilakukan pada cairan serebrospinal (CSF), lendir saluran serviks (serviks), cairan ketuban bahkan cairan. tubuh kaca(bola mata).

Sebelum mendonor darah, pasien diperingatkan bahwa ia tidak boleh minum obat apa pun, dan pengobatan dengan antibiotik dan obat antivirus disarankan untuk menyelesaikan setidaknya dua minggu sebelum pengambilan sampel darah.

Ketentuan penerimaan dan interpretasi hasil

Waktu penerimaan respons dari laboratorium tidak bergantung pada kecepatan kerjanya, tetapi pada stadium penyakit dan antibodi apa yang sudah muncul di dalam darah. Jadi, misalnya: imunoglobulin M muncul kira-kira 2 minggu setelah pengambilan darah untuk dianalisis dan berarti prosesnya berada pada tahap infeksi primer atau telah terjadi eksaserbasi kronis. Pada saat yang sama, antibodi kelas M dan G muncul selama infeksi primer. Apalagi yang terakhir bisa dideteksi setelah 4 minggu.

IgA muncul setelah 2-3 minggu baik sendiri atau bersama dengan M, menunjukkan infeksi akut, atau bersama dengan G, menunjukkan proses kronis.

Seperti tanggal yang berbeda munculnya antibodi dalam darah akan membuat pasien menunggu lama untuk hasilnya. Dapat diterima untuk menunggu lebih dari sebulan setelah analisis ELISA dilakukan. Decoding dan interpretasi oleh dokter juga membutuhkan waktu tertentu.

Dengan kemajuan kedokteran modern adalah mungkin untuk melakukan diagnosa yang lebih mendalam jika dicurigai adanya patologi tertentu pada pasien. Salah satu metode informatif penelitian laboratorium adalah analisis ELISA, yang dilakukan dengan metode pengambilan darah vena. Artinya, tidak ada yang berubah bagi pasien secara keseluruhan. Tetapi asisten laboratorium ELISA melakukan teknik kompleks untuk mempelajari biomaterial yang terkumpul. Apa itu analisis ELISA dan apa seluk-beluk penggunaan metode ELISA sebagai diagnostik, kami memahami materi di bawah ini.

Apa itu immunoassay enzim?

Produksi antibodi dipicu oleh antigen itu sendiri yang telah masuk ke dalam tubuh manusia. Ketika memasuki "pertempuran" untuk kesehatan tubuh, antibodi seolah-olah menandai diri mereka sendiri dengan antigen, yang dilihat oleh asisten laboratorium dalam tes darah. Artinya, dalam biomaterial yang terkumpul, dimungkinkan untuk melacak tidak hanya keberadaan infeksi, tetapi juga jejaknya setelah tubuh pulih sepenuhnya.

Dengan demikian, menugaskan uji imunosorben terkait darah ke pasien, dokter yang merawat dapat melacak durasi infeksi, tingkat perkembangannya, atau mengidentifikasi adanya kekebalan terhadap infeksi tertentu.

Proses diagnostik ELISA terlihat seperti ini:

• Darah vena yang diambil dibawa di laboratorium ke keadaan serum darah;
• Kemudian asisten laboratorium menggunakan baki khusus dengan sel yang masing-masing sudah berisi semua antigen yang diperlukan. Cukup dengan menjatuhkan serum darah ke setiap sel dan melacak reaksi imunoglobulin (antibodi) terhadap antigen. Adanya reaksi yang “diinginkan” ditunjukkan dengan adanya perubahan warna pada bahan yang diteliti. Ke depan, asisten laboratorium mempelajari kerapatan optik dari medium yang diteliti.

• Ascariasis dan enterobiasis (cacing gelang dan cacing kremi);
• Trikinosis;
• Opisthorchiasis dalam bentuk akut dan kronis;
• Giardiasis;
• Amuba;
• Toksoplasmosis;
• Leishmaniasis dalam bentuk apa pun.

Penting: immunoassay enzim dapat bersifat kualitatif dan kuantitatif. Dalam kasus pertama, asisten laboratorium hanya mengkonfirmasi atau menyangkal keberadaan zat yang diinginkan dalam darah. Dalam kasus kedua, sebagai hasil analisis, konsentrasinya dalam tubuh pasien diindikasikan.

Kerugian dari metode ini

Dengan segala kelebihan metode diagnostik ini, perlu dipahami bahwa enzim immunoassay bukanlah cara untuk menemukan penyebab penyakit pasien, melainkan hanya metode konfirmasi diagnosis yang dituduhkan oleh dokter yang merawat. Dan mengingat penelitian ini cukup mahal, maka harus digunakan dengan bijak. Dalam hal ini, hasil penelitian harus ditafsirkan hanya oleh spesialis yang berkualifikasi.

Menguraikan hasil

Setelah kita bongkar singkatan IFA dan apa itu ─ ditemukan, ada baiknya beralih ke interpretasi hasil. Penting untuk dipahami di sini bahwa jika analisis dilakukan secara kualitatif, maka hasilnya hanya positif atau negatif. Artinya, diagnosis tersebut mengkonfirmasi kecurigaan dokter tentang diagnosis tertentu, atau membantahnya. Dalam hal ini, formulir akan berisi simbol "+" atau "-", masing-masing.

Penting: Hasil tes negatif tidak selalu menunjukkan tidak adanya infeksi. Faktanya adalah antibodi terhadap antigen dapat terbentuk dalam waktu 14 hari setelah infeksi dan kemungkinan besar belum terbentuk.

Jika analisis kuantitatif dilakukan, maka jenis antibodi, jumlah dan tahapan aktivitasnya ditentukan di sini. Secara khusus, dengan diagnosis seperti itu, antibodi (imunoglobulin) IgG dan IgM ditentukan, yang terbentuk pada periode perkembangan infeksi yang berbeda. Hasil paling umum dalam kasus ini adalah:

• Peningkatan IgM dan tidak adanya IgG sama sekali. Gambar ini menunjukkan infeksi baru-baru ini dan fase patologi akut.
• Peningkatan aktivitas kedua jenis imunoglobulin (IgM dan IgG). Dia berbicara tentang proses infeksi jangka panjang dan kronis.
• Aktivitas IgG dan tidak adanya IgM sama sekali. Infeksi itu setidaknya enam bulan lalu dan sekarang virus itu dalam tahap kronis yang berkepanjangan.
• Tidak adanya antibodi IgG dan IgA. Hasilnya tidak terdefinisi.
• Tidak adanya antibodi IgM, IgA dan IgG. Menunjukkan kurangnya kekebalan terhadap infeksi tertentu.
• Aktivitas antibodi IgG, IgM dan IgA menunjukkan eksaserbasi proses kronis.

Selain mengidentifikasi jenis antibodi, asisten laboratorium dalam kolom formulir khusus juga menunjukkan jumlahnya per volume darah. Ingat, setelah memahami apa itu metode ELISA, jangan menafsirkan sendiri hasilnya. Hasil yang diperoleh hanya dapat diinterpretasikan dengan akurat oleh dokter yang hadir, tergantung pada diagnosis yang diusulkan, dibangun atas dasar Gambaran klinis pada pasien.

Paling sering dalam prakteknya, tiga varian dari immunoassay fase padat digunakan - immunoassay tidak langsung, immunoassay langsung dan immunoassay tipe sandwich. Perbedaan antara jenis immunoassay ini adalah sebagai berikut. Dalam versi tidak langsung dari immunoassay, antigen diserap pada permukaan sumur pelat polistiren pada tahap pertama. Setelah penghilangan molekul antigen yang tidak terikat, sampel yang mengandung antibodi spesifik untuk antigen tersebut ditambahkan. Kompleks antigen-antibodi yang dihasilkan dideteksi menggunakan antibodi anti-spesies yang dikonjugasikan ke label (Gbr. 1A). Dalam versi langsung dari immunoassay, deteksi antigen yang terserap dilakukan secara langsung dengan bantuan antibodi spesifik yang terkonjugasi dengan label (Gbr. 1B). Dalam immunoassay tipe sandwich, pada tahap pertama, bukan antigen yang diserap pada permukaan pelat, tetapi antibodi spesifik untuk antigen yang diteliti (antibodi substrat). Setelah menghilangkan molekul antibodi yang tidak terikat, sampel yang mengandung antigen ditambahkan. Untuk mendeteksi kompleks antibodi substrat-antigen yang terbentuk, ditambahkan antibodi kedua yang spesifik untuk epitop antigen lain yang berjarak spasial, terkonjugasi dengan beberapa label (Gbr. 1B). Penggunaan antibodi tipe sandwich yang spesifik untuk dua epitop antigen yang berbeda dalam immunoassay memungkinkan untuk mencapai sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi dalam menentukan antigen bahkan dalam sampel heterogen seperti plasma darah.

Beras. 1. Prinsip immunoassay (A), langsung (B) dan tipe sandwich (C) tidak langsung

Immunoassay enzim tidak langsung (ELISA tidak langsung)

Metode immunoassay tidak langsung ditandai dengan penerapan proses 3 tahap, tahap pertama di mana antigen diadsorpsi pada plastik yang disiapkan khusus, tahap kedua antibodi spesifik berinteraksi dengan antigen, dan tahap ketiga anti -spesies antibodi dimasukkan ke dalam sistem, terkonjugasi dengan enzim yang menentukan indikator reaksi enzimatik. . Dalam metode ini, horseradish peroxidase digunakan sebagai enzim. Reaksi dilakukan dalam pelat 96-sumur khusus.

I. Penyerapan antigen

Di sumur pelat 96 sumur untuk immunoassay, serap antigen 0,1-0,5 µg per sumur dalam 100 µl phosphate-buffered saline (PBS). Inkubasi dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dan digoyangkan pada shaker plate horizontal. Pencucian (2 kali lipat) molekul antigen yang tidak terikat dilakukan dengan saline buffer fosfat yang mengandung 0,1% Tween-20 (PBST).

II. pemblokiran

Untuk memblokir situs pengikatan non-spesifik, sumur tablet diisi dengan PBST dan diinkubasi selama 10-15 menit pada suhu kamar.

AKU AKU AKU. Pewarnaan antibodi spesifik

Pemutaran dapat dilakukan baik di baris tablet horizontal maupun vertikal. Perlu dicatat bahwa triturasi antibodi dilakukan jika perlu untuk memilih konsentrasi antibodi yang optimal atau menentukan titernya. Jika konsentrasi optimal dan / atau titer antibodi ditentukan, maka pengenceran yang direkomendasikan untuk antibodi spesifik ini digunakan.

Saat triturasi, pengenceran antibodi yang sudah jadi dimasukkan ke dalam sumur pertama dari baris - rata-rata 1-10 μg per sumur, kemudian pengenceran antibodi berurutan dilakukan di dalam sumur. Inkubasi dengan antibodi spesifik dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dan dikocok di atas piring pengocok horizontal. Pencucian dilakukan dengan PBST sebanyak 3 kali.

IV. Penambahan antibodi anti-spesies terkonjugasi dengan label enzim

Sebagai antibodi pendeteksi (sekunder), antibodi poliklonal anti-spesies yang terkonjugasi dengan peroksidase lobak digunakan. Paling sering, antibodi kambing atau kelinci digunakan, spesifik untuk seluruh molekul atau fragmen Fc dari antibodi spesifik. Konsentrasi antibodi pendeteksi biasanya ditunjukkan oleh pabrikan sebagai pengenceran larutan stok (misalnya, 1:1000). Inkubasi dengan antibodi sekunder dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dan dikocok di atas piring pengocok horizontal. Pencucian dilakukan dengan PBST sebanyak 5-6 kali.

Peroksidase lobak mengkatalisasi reaksi oksidasi substrat dengan hidrogen peroksida. O-phenylenediamine (OPD) digunakan sebagai substrat untuk horseradish peroxidase. Sebagai hasil dari reaksi, produk oksidasi OPD berwarna terbentuk.

Larutan substrat: Untuk 10 ml buffer substrat (buffer Na-sitrat 0,1 M, pH 4,5) tambahkan 0,01 ml hidrogen peroksida 30% dan 0,2 ml larutan 50x OFD (340 mg OFD dalam 10 ml etanol; simpan pada -20 °C).

Inkubasi dilakukan selama 10 menit pada suhu ruang dan digoyangkan pada shaker pelat horizontal.

V. Menghentikan Reaksi Enzimatik

VI. Pengukuran kepadatan optik

Immunoassay enzim langsung (ELISA langsung)

Metode immunoassay langsung hanya memiliki sedikit perbedaan dibandingkan dengan metode immunoassay tidak langsung. Dengan demikian, langkah I dan II adalah sama pada kedua jenis analisis tersebut. Perbedaannya terletak pada fakta bahwa dalam versi langsung dari immunoassay tahap III, antibodi spesifik yang terkonjugasi dengan label enzim digunakan. Jika perlu, juga memungkinkan untuk melakukan triturasi antibodi spesifik yang terkonjugasi dengan label enzim, serupa dengan yang dijelaskan sebelumnya untuk antibodi yang tidak terkonjugasi. Tahap IV dihilangkan, dan tahap selanjutnya (V-VII) dilakukan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan di atas untuk varian tidak langsung dari immunoassay.

immunoassay tipe sandwich

Beras. 2. Representasi skematis dari immunoassay tipe "sandwich". ATp adalah antibodi substrat, ATd adalah antibodi pendeteksi, AG adalah antigen, M adalah label yang terikat secara kovalen dengan antibodi pendeteksi, P adalah substrat tempat antibodi substrat diadsorpsi.

Dalam varian immunoassay ini (Gbr. 2), sepasang antibodi spesifik untuk epitop yang berjarak spasial dari antigen yang diteliti digunakan.

I. Penyerapan antibodi terhadap substrat

Di sumur pelat 96-sumur untuk immunoassay, serap substrat antibodi 1-2 µg per sumur dalam 100 µl phosphate-buffered saline (PBS). Inkubasi dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dan digoyangkan pada shaker plate horizontal. Pencucian (2 kali lipat) molekul antigen yang tidak terikat dilakukan dengan saline buffer fosfat yang mengandung 0,1% Tween-20 (PBST).

II. pemblokiran

Untuk memblokir situs pengikatan non-spesifik, sumur diisi dengan PBST dan diinkubasi selama 10-15 menit pada suhu kamar.

AKU AKU AKU. Inkubasi dengan antigen

Di sumur tablet dengan antibodi yang diserap sebelumnya berkontribusi 50 μl larutan uji atau pengenceran standar antigen. Pengenceran antigen harus disiapkan dari PBST karena Tween-20 mengurangi pengikatan non-spesifik molekul protein satu sama lain dan ke permukaan pelat. Larutan uji dan pengenceran standar antigen ditambahkan berpasangan (atau 3 ulangan), menggunakan dua (tiga) lubang untuk setiap pengenceran protein. Inkubasi dilakukan pada suhu kamar selama 30 menit dengan pengadukan konstan. Pencucian dilakukan dengan larutan PBST sebanyak 3 kali.

IV. Inkubasi dengan antibodi berlabel enzim

100 μl larutan antibodi spesifik yang terkonjugasi dengan label enzim ditambahkan ke sumur tablet. Konsentrasi optimal dari antibodi terkonjugasi biasanya ditentukan oleh produsen (biasanya digunakan konsentrasi 2-4 µg/ml). Inkubasi dengan antibodi yang mengandung label enzim dilakukan selama 30 menit pada suhu kamar dan dikocok di atas piring pengocok horizontal. Pencucian dilakukan dengan PBST sebanyak 5-6 kali.

V. Melakukan reaksi enzimatik yang disertai dengan munculnya produk berwarna

100 μl larutan substrat ditambahkan ke sumur dan diinkubasi selama 10 menit pada suhu kamar dengan pengadukan konstan.

VI. Menghentikan reaksi enzimatik

Sebelum mengukur kerapatan optik, reaksi warna dihentikan dengan 0,5 M H 2 SO 4 . Setelah inkubasi, 50 μl larutan asam sulfat 0,5 M ditambahkan ke sumur dengan larutan kerja OFD. Setelah itu, Anda dapat langsung mulai mengukur kerapatan optik.

VII. Pengukuran kepadatan optik

Kerapatan optik larutan produk berwarna diukur pada λ=490 nm menggunakan spektrofotometer pelat.

Dalam daftar standar tindakan diagnostik digunakan untuk penyakit menular termasuk enzim immunoassay. Jika ELISA sifilis positif, jangan langsung panik.

Mari kita pertimbangkan secara lebih rinci fitur-fitur metodologi penelitian ini dan prinsip-prinsip penguraian hasil yang diperoleh di kategori yang berbeda pasien.

Enzyme immunoassay adalah salah satu metode yang paling umum untuk mendiagnosis penyakit menular. Ini termasuk dalam kategori tes treponemal, yaitu dapat digunakan untuk menentukan keberadaan agen penyebab sifilis - treponema pucat di tubuh pasien.

Dengan ELISA, sifilis terdeteksi karena deteksi antibodi terhadap treponema. Mereka terkandung dalam darah pasien, dan jenis serta jumlahnya bergantung pada stadium dan bentuk penyakit, yang memungkinkan Anda untuk mendapatkannya informasi penting tentang kondisi kesehatan manusia saat ini.

Keuntungan dan kerugian

ELISA sangat sering diresepkan untuk dugaan sifilis atau lainnya penyakit menular. Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa analisis memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi jenis dan stadium penyakit yang tepat, dan keandalannya tetap pada tingkat tinggi - kemungkinan kesalahan berdasarkan hasil beberapa penelitian hanya 1%, ELISA primer memiliki akurasi sekitar 90%.

Penggunaan reagen berkualitas tinggi dan peralatan modern memungkinkan kami memaksimalkan keakuratan indikator.

Secara umum, keuntungan dari metode ini adalah:

1. Akurasi hasil yang tinggi. Kemungkinan menerima data palsu sangat kecil.
2. Meminimalkan pengaruh faktor manusia. Peralatan modern untuk melakukan ELISA mengecualikan pengaruh manusia terhadap hasil penelitian karena proses otomatisasi.
3. Deteksi antibodi spesifik. Tidak mungkin membingungkan antigen dari satu jenis dengan yang lain, sehingga analisis menunjukkan hasil yang akurat untuk diagnosis tertentu.
4. Memperbaiki penyimpangan sekecil apa pun dari norma. Bahkan konsentrasi agen patologis terkecil pun tidak akan luput dari perhatian.

Jangan lupakan kelemahan metode ini. ELISA memiliki kelemahan sebagai berikut:

1. Harga tinggi. Tingginya biaya disebabkan oleh banyak faktor, khususnya kebutuhan akan peralatan yang baik, reagen berkualitas tinggi, dan spesialis dengan tingkat pelatihan yang memadai.
2. Perlunya diagnosis awal. Anda perlu mengetahui antigen mana yang harus dicari, karena tanpa data tambahan tidak mungkin membuat diagnosis yang akurat.
3. Probabilitas hasil positif palsu. Beberapa kondisi tubuh dan faktor lain dapat mendistorsi data akhir.

Indikasi untuk melaksanakan

Dokter mungkin meresepkan immunoassay enzim untuk mendiagnosis tidak hanya sifilis, tetapi juga sejumlah penyakit menular lainnya.

Jika kita mempertimbangkan situasi secara langsung dengan infeksi treponema, alasan pemeriksaannya mungkin:

• munculnya gejala eksternal penyakit (chancres, ruam sifilis, gumma, dll.);
• penurunan kekebalan yang signifikan;
• identifikasi atau kecurigaan sifilis pada pasangan seksual, kerabat dan anggota keluarga;
• reaksi positif selama tes lainnya;
• identifikasi penyakit lain yang mungkin terkait dengan sifilis;
• keinginan pribadi seseorang untuk diperiksa.

Metode pelaksanaan

ELISA dapat dilakukan cara yang berbeda. Dalam setiap kasus, opsi yang paling cocok dipilih.

Pertama-tama, ada pembagian metode menjadi:

1. Kualitatif. Adanya infeksi atau virus dalam tubuh pasien terdeteksi.
2. Kuantitatif. Menentukan konsentrasi antibodi terhadap agen patogen dalam tubuh manusia, yang menunjukkan stadium dan intensitas perkembangan penyakit.

Ada juga klasifikasi metode untuk melakukan ELISA sesuai dengan prinsip mereproduksi reaksi yang diperlukan.

Ada 3 opsi:

1. Lurus. Antibodi berlabel disuntikkan ke dalam sampel darah yang disediakan.
2. Tidak langsung dengan antigen. Antigen yang terserap sebelumnya ditempatkan dalam sel pelat polistiren yang ditujukan untuk ELISA. Kemudian antibodi virus ditambahkan ke dalamnya, yang memicu pembentukan kompleks imun yang diperlukan untuk evaluasi hasil lebih lanjut.
3. Tidak langsung dengan antibodi. Untuk penyakit menular seksual, metode ini sering digunakan. Ini melibatkan penyerapan awal antibodi, baru kemudian antigen ditambahkan ke piring.

Aturan pengambilan sampel bahan

Untuk mengurangi risiko mendapatkan hasil yang salah, perlu mendonorkan darah untuk analisis dengan benar.

Sebelum menjalani ELISA, beberapa pantangan harus diperhatikan:

• hindari stres fisik dan emosional yang intens;
• berhenti merokok dan minum alkohol minimal 1 sampai 3 hari sebelumnya;
• selama beberapa hari Anda perlu beralih ke nutrisi yang tepat;
• wanita diinginkan untuk mengontrol fase siklus menstruasi, karena hormon dapat merusak hasil;
• makan terakhir harus 8-10 jam sebelum donor darah;
• selama 10 hari, obat-obatan yang dapat mempengaruhi hasil penelitian dikeluarkan.

Untuk ELISA, darah vena diambil dari vena cubiti, harus diminum pagi hari dengan perut kosong. Secara umum, aturan standar untuk persiapan pengambilan sampel darah vena berlaku. Bergantung pada penyakit mana yang sedang diuji, persyaratan tambahan mungkin berlaku. persiapan awal sabar.

Metodologi

Petunjuk untuk melakukan ELISA cukup sederhana:

1. Pasien mengambil darah dari vena.
2. Bahan yang diambil sedang disiapkan dan dibagi menjadi sampel pada palet jaring halus khusus.
3. Antigen dicampur dengan antibodi sesuai dengan metode yang dipilih.
4. Reaksi dievaluasi. Sampel dibandingkan dengan sampel kontrol, evaluasi hasil secara kualitatif dan kuantitatif dilakukan.
5. Data dimasukkan dalam tabel khusus dengan penerapan indikator kuantitatif (total antibodi).
6. Dokter yang hadir menguraikan hasilnya. Jika perlu, perawatan yang tepat ditentukan.

Setelah pemeriksaan, pasien diberikan dokumen dengan hasilnya. Ini memiliki bentuk tabel dengan sebutan yang sesuai di seberang setiap jenis imunoglobulin di persimpangan dengan nama penyakit menular.

Dekripsi

Hanya seorang spesialis yang dapat menguraikan hasil analisis dengan benar. Sulit untuk mengetahuinya sendiri, misalnya, apa arti hasil ELISA k = 1 4. Sifilis juga dapat terjadi dalam berbagai bentuk, yang juga memengaruhi data akhir.

Hasilnya menunjukkan 3 jenis imunoglobulin:

1. IgM. Izinkan untuk menentukan periode infeksi sifilis. Hasil positif menunjukkan eksaserbasi penyakit. Ketidakhadiran mereka dapat mengindikasikan remisi patologi kronis atau bentuk penyakit laten.
2. IgA. Menunjukkan penyakit yang sudah berumur lebih dari sebulan sejak terinfeksi. Ini juga merupakan tanda fase akut penyakit, baik dengan patologi biasa maupun kronis lanjut.
3. IgG. Ini adalah tanda periode puncak penyakit, yaitu eksaserbasinya. Dengan sifilis, reaksi positif muncul beberapa saat setelah pengobatan. Pada beberapa jenis penyakit, ini bisa menjadi tanda kekebalan yang berkembang.

Zat-zat tersebut diproduksi oleh tubuh dalam urutan tertentu, yang merupakan tanda tambahan penyakit. Dengan tes kualitatif, hanya keberadaan imunoglobulin dalam darah dari setiap jenis yang ditetapkan.

Ini dinyatakan dalam perubahan warna bahan yang terlibat dalam analisis. Indikator kuantitatif adalah tambahan, mereka menggambarkan situasi dengan lebih akurat. Rasio antigen dan antibodi menunjukkan tingkat keparahan penyakit dan intensitas respons tubuh.

Apa yang harus dilakukan

Jika pasien benar-benar menderita sifilis, ELISA positif selalu terdeteksi, tidak mungkin untuk tidak memperhatikan adanya treponema dalam penelitian semacam itu. Jangan putus asa, penyakit ini merespon pengobatan dengan baik, terutama pada tahap awal.

Apa yang harus dilakukan jika hasil tes positif:

• menjalani pemeriksaan tambahan sesuai indikasi dokter;
• ikuti kursus terapi antibiotik sesuai dengan skema yang dipilih;
• fokus pada penguatan sistem kekebalan;
• beri tahu pasangan seksual Anda tentang penyakit ini;
• di masa depan, secara teratur menjalani diagnosa pencegahan sampai deregistrasi di apotik (setelah 5 tahun tanpa hasil tes positif).

Tidak perlu menunda cuti sakit dan takut mempublikasikan hasilnya. Diagnosis dienkripsi dan dirahasiakan, hanya jika ada ancaman infeksi pada orang lain, perlu untuk memberi tahu kerabat dan pasangan seksual tentang masalah tersebut sehingga mereka menjalani pemeriksaan yang diperlukan.

Hasil positif palsu dan penyebabnya

Terkadang hasil tes lain dicatat dan ELISA positif palsu untuk sifilis. Itu sebabnya disarankan untuk melakukan 2 - 3 metode pembantu dan setelah beberapa saat ulangi enzim immunoassay.

Ketidakakuratan seperti itu jarang terjadi, terutama disebabkan oleh faktor-faktor berikut:

• kehamilan;
• penyakit kronis;
• vaksinasi baru-baru ini;
• cedera.

Hasil positif palsu dibagi menjadi akut dan kronis, tergantung pada sifat faktor yang memprovokasi mereka.

Yang utama disajikan dalam tabel:

Untuk masalah kesehatan ini, tes sifilis mungkin menunjukkan hasil positif, tetapi ini hanyalah konsekuensi dari produksi protein tubuh untuk melawan penyakit. Namun, ELISA mengenalinya sebagai antigen.

Anak yang sehat hingga usia satu setengah tahun dapat mengalami hasil ELISA positif palsu jika seorang wanita terinfeksi sifilis selama kehamilan. Sebelum usia ini, darah belum sempat memperbarui dirinya sepenuhnya, sehingga antibodi ibu mungkin ada di dalamnya. Pengecualian adalah situasi dengan deteksi imunoglobulin IgM.

Anda dapat mempelajari lebih lanjut tentang fitur enzim immunoassay dan metodologinya dengan menonton video di artikel ini.