इसमें एरिथ्रोसाइट्स या तटस्थ सिंथेटिक सामग्री (उदाहरण के लिए, लेटेक्स कण) का उपयोग किया जाता है, जिसकी सतह पर एंटीजन (बैक्टीरिया, वायरल, ऊतक) या एंटीबॉडी सोख लिए जाते हैं। उनका समूहन तब होता है जब उपयुक्त सीरा या एंटीजन मिलाए जाते हैं। एंटीजन के साथ संवेदनशील आरबीसी को एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम कहा जाता है और इसका उपयोग एंटीबॉडी का पता लगाने और टाइट्रेट करने के लिए किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील होते हैं। इम्युनोग्लोबुलिन एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम कहा जाता है और एंटीजन का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है।

निष्क्रिय हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग बैक्टीरिया (टाइफाइड और पैराटाइफाइड, पेचिश, ब्रुसेलोसिस, प्लेग, हैजा, आदि), प्रोटोजोआ (मलेरिया) और वायरस (इन्फ्लूएंजा, एडेनोवायरस संक्रमण, वायरल हेपेटाइटिस बी, खसरा, टिक-जनित) के कारण होने वाली बीमारियों के निदान के लिए किया जाता है। एन्सेफलाइटिस, क्रीमियन रक्तस्रावी बुखार, आदि), साथ ही कुछ हार्मोन निर्धारित करने के लिए, रोगी की अतिसंवेदनशीलता की पहचान करने के लिए दवाइयाँऔर पेनिसिलिन और इंसुलिन जैसे हार्मोन।

निष्क्रिय रक्तगुल्म (आरपीएचए) की प्रतिक्रिया। निष्क्रिय हेमग्लूटीनेशन परीक्षण सीरोलॉजिकल निदान की एक संवेदनशील विधि है और इसका उपयोग प्रारंभिक और पूर्वव्यापी निदान दोनों के साथ-साथ टीकाकरण वाले लोगों की प्रतिरक्षाविज्ञानी स्थिति का निर्धारण करने के लिए किया जाता है। टुलारेमिया के रोगियों में, एंटीबॉडी का पता आमतौर पर बीमारी के पहले या दूसरे सप्ताह के अंत में लगाया जाता है, 1-1.5 महीने के बाद टीपीएचए टाइटर्स अधिकतम मूल्यों (1:100,000-1:20,000, कम अक्सर अधिक) तक पहुंच जाते हैं। जिसे वे 1:100-1:200 के स्तर पर कम कर देते हैं जो लंबे समय तक बना रहता है।

टीका लगाए गए लोगों में, एंटीबॉडी का भी लगातार पता लगाया जाता है, हालांकि, निचले टाइटर्स में, टीकाकरण के 1-1.5 महीने बाद 1:2000-1:5000 से अधिक नहीं, वे 1:20-1:80 के निम्न स्तर पर कई वर्षों तक बने रहते हैं।

टुलारेमिया एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (एंटीजेनिक) आरपीएचए की स्थापना के लिए एक एंटीजन के रूप में कार्य करता है। यह दवा ट्यूलरेमिया एंटीजन के साथ संवेदनशील रैम एरिथ्रोसाइट्स को औपचारिक रूप देती है, जो तरल और सूखे रूप में उपलब्ध है। तरल तैयारी - 10% एकाग्रता के फॉर्मेलिन समाधान में एरिथ्रोसाइट्स का 10% निलंबन। सूखी लियोफिलिज्ड तैयारी - परिरक्षक के बिना एरिथ्रोसाइट्स का वैक्यूम-सूखा 10% निलंबन। उपयोग से पहले, इसे लेबल पर दिए निर्देशों के अनुसार पतला किया जाता है। पॉलीस्टाइरीन प्लेटों में प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, दोनों दवाओं का उपयोग 2.5% एकाग्रता पर किया जाता है, और माइक्रोवॉल्यूम में प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, 0.5% एकाग्रता पर किया जाता है।

आरपीजीए सेटिंग तकनीक। परीक्षण सीरा को सलाइन 1:5 (1:10) से पतला किया जाता है और 30 मिनट के लिए 56°C पर गर्म किया जाता है। उसके बाद, रैम एरिथ्रोसाइट्स में विषम एंटीबॉडी को हटाने के लिए, सीरा को औपचारिक रैम एरिथ्रोसाइट्स के 50% निलंबन के साथ इलाज किया जाता है। ऐसा करने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को 2 बूंदों (0.05 मिली) प्रति 1 मिली सीरम की दर से मिलाया जाता है और हिलाकर अच्छी तरह मिलाया जाता है। सीरम को एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण अवसादन तक छोड़ दिया जाता है, या कमरे के तापमान पर एक घंटे के बाद सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, जिसके बाद यह शोध के लिए तैयार होता है।

तनुकरण तरल को 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में पॉलीस्टाइनिन प्लेट के कई कुओं में डाला जाता है। सीरा के प्रारंभिक अध्ययन में, प्लेट की एक छोटी पंक्ति (6-छेद) में प्रतिक्रिया स्थापित करके उनका परीक्षण करने की सलाह दी जाती है। सीरा की एक छोटी श्रृंखला में एंटीबॉडी का पता लगाने के मामले में, सीरा की तनुकरण की एक लंबी श्रृंखला (12 कुएं) में फिर से जांच की जाती है। तनु द्रव को गिराने के बाद, 1:5 तनुकरण में परीक्षण सीरा का 0.5 मिलीलीटर प्रत्येक पंक्ति के पहले कुएं (छोटी या लंबी) में मिलाया जाता है। फिर, समान मात्रा में, सीरम को दो गुना तनुकरण के साथ अनुमापन किया जाता है। इस प्रकार, सीरम तनुकरण 1:10 से 1:320 तक एक छोटी श्रृंखला में और एक लंबी श्रृंखला में - 1:10 से 1:20480 तक प्राप्त किया जाता है। सीरा के अनुमापन के बाद, संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के कामकाजी 2.5% निलंबन की एक बूंद (0.05 मिली) प्रत्येक कुएं में डाली जाती है। एक सजातीय निलंबन प्राप्त होने तक प्लेटों की सामग्री को अच्छी तरह से हिलाया जाता है। प्लेटों को कमरे के तापमान पर टेबल की स्थिर सतह पर छोड़ दिया जाता है। प्रतिक्रिया का प्रारंभिक पंजीकरण 2-3 घंटों के बाद किया जाता है, टिटर का अंतिम निर्धारण कुओं में एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण अवसादन के बाद किया जाता है। प्रतिक्रिया के लिए निम्नलिखित नियंत्रण प्रदान किए गए हैं: 1) 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में 1:10 के कमजोर पड़ने पर परीक्षण सीरम + असंवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन की 1 बूंद; 2) 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में एक पतला तरल + गैर-संवेदी एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन की 1 बूंद; 3) 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में तरल को पतला करना + संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन की 1 बूंद। सभी नियंत्रणों को स्पष्ट रूप से नकारात्मक प्रतिक्रिया देनी चाहिए।

आरपीजीए का लेखांकन और मूल्यांकन। प्रतिक्रिया का मूल्यांकन निम्नलिखित योजना के अनुसार किया जाता है:

1) तेजी से सकारात्मक प्रतिक्रिया(++++) - एरिथ्रोसाइट्स एक "छाता" के रूप में एक समान परत में कुएं के तल पर गिरते हैं, जिसमें अक्सर स्कैलप्ड किनारे होते हैं;

2) सकारात्मक प्रतिक्रिया (+++) - एरिथ्रोसाइट्स छेद के नीचे के कम से कम 2/3 हिस्से को कवर करते हैं;

3) कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रिया (++) - एग्लूटीनेट छोटा है और छेद के बिल्कुल केंद्र में स्थित है;

4) संदिग्ध प्रतिक्रिया (+) - छिद्र के बिल्कुल केंद्र में एरिथ्रोसाइट तलछट के चारों ओर एग्लूटीनेट के अलग-अलग दाने होते हैं;

5) नकारात्मक (-) - छेद के तल पर, एरिथ्रोसाइट्स एक "बटन" या चिकनी, तेजी से परिभाषित किनारों के साथ एक छोटी अंगूठी के रूप में बस जाते हैं।

सीरम टिटर को अंतिम सीरम कमजोर पड़ने के अनुसार ध्यान में रखा जाता है, जिसने बहुत स्पष्ट प्रतिक्रिया दी (कम से कम तीन प्लस)। 1:100 और उससे अधिक के कमजोर पड़ने को डायग्नोस्टिक टिटर माना जाता है, हालांकि, आरए के मामले में, इसकी वृद्धि की निगरानी करना आवश्यक है।

टुलारेमिया में टीपीएचए काफी विशिष्ट है और केवल ब्रुसेलोसिस सीरा के साथ कुछ क्रॉस-प्रतिक्रियाओं का पता लगाता है। टीपीएचए में टाइटर्स की ऊंचाई से विभेदक निदान संभव है, जो एक समजात एंटीजन के साथ बहुत अधिक है।

माइक्रोवॉल्यूम में आरपीएचए सेट करने की तकनीक। आरपीएचए को ताकाची-प्रकार के माइक्रोटिटर (या माइक्रोपिपेट के साथ गोल तल वाली माइक्रोटिटर प्लेट) का उपयोग करके माइक्रोवॉल्यूम में किया जा सकता है, जो सामग्री को 25 μl और 50 μl की मात्रा में शीर्षक देने की अनुमति देता है। प्रतिक्रियाओं को स्थापित करने की तकनीक, सभी परिचालनों का क्रम पॉलीस्टीरिन प्लेटों में अध्ययन के समान ही है। हालाँकि, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि माइक्रोमेथोड की संवेदनशीलता आमतौर पर मैक्रोमेथोड की तुलना में एक कमजोर पड़ने (यानी, 2 गुना) कम होती है।

ड्रॉपर पिपेट का उपयोग करके माइक्रोटिटर में प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, प्रत्येक कुएं में 50 μl की मात्रा में एक पतला तरल डाला जाता है। फिर, 50 μl हेड वाले टाइट्रेटर्स का उपयोग करके, सिर को इसमें डुबो कर परीक्षण सीरम लिया जाता है। सुनिश्चित करें कि तरल ने टिट्रेटर सिर को भर दिया है। सीरम के साथ टिट्रेटर को पहले कुएं में स्थानांतरित किया जाता है और, इसे ऊर्ध्वाधर स्थिति में पकड़कर, दोनों दिशाओं में कई घूर्णी गति की जाती है। फिर टिट्रेटर को अगले कुएं में स्थानांतरित कर दिया जाता है और हेरफेर दोहराया जाता है। अनुमापन कई पंक्तियों में एक साथ किया जा सकता है। पूरी पंक्ति के अनुमापन के बाद, अनुमापक को घूर्णी गति के माध्यम से आसुत जल (2 भागों के परिवर्तन के साथ) से धोया जाता है, पानी को एक स्वाब के साथ सिर से हटा दिया जाता है और बर्नर की लौ पर जला दिया जाता है।

अनुमापन के बाद, 25 μl एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम को कुओं में जोड़ा जाता है। माइक्रोवॉल्यूम में आरपीएचए के लिए डायग्नोस्टिकम की एकाग्रता 0.5% होनी चाहिए (यानी, एरिथ्रोसाइट्स का 2.5% निलंबन अतिरिक्त रूप से 5 गुना पतला होता है)। एरिथ्रोसाइट्स जोड़ने के बाद, एक सजातीय निलंबन प्राप्त होने तक प्लेटों को धीरे से हिलाया जाना चाहिए। परिणाम 1-1.5 घंटे के बाद ही रिकॉर्ड किए जा सकते हैं, जो माइक्रोटिटर में आरपीएचए का एक महत्वपूर्ण लाभ है। इसके अलावा, इस विधि में प्रतिक्रिया के सभी अवयवों और परीक्षण सीरा की थोड़ी मात्रा की आवश्यकता होती है।

प्रतिक्रिया का हिसाब इस प्रकार है:

1) "+" - पूर्ण रक्तगुल्म, जिसमें एरिथ्रोसाइट्स एक "छाता" के रूप में एक समान परत में कुएं के तल पर गिरते हैं, जो तल के कम से कम 2/3 भाग पर कब्जा कर लेते हैं;

2) "+ -" - आंशिक रक्तगुल्म, जिसमें एरिथ्रोसाइट्स छोटे आकार की ढीली अंगूठी के रूप में नीचे की ओर गिरते हैं;

3) "-" - हेमग्लूटीनेशन की अनुपस्थिति, जब एरिथ्रोसाइट्स एक छोटे बटन या चिकने किनारे वाली रिंग के रूप में नीचे की ओर गिरते हैं।

टीपीएचए में प्राप्त सकारात्मक परिणाम की विशिष्टता का परीक्षण तीन-घटक प्रतिक्रिया - निष्क्रिय हेमग्लूटिनेशन (आरपीएचए) के निषेध की प्रतिक्रिया का उपयोग करके किया जा सकता है।

आरटीपीजीए सेटिंग तकनीक। यह प्रतिक्रिया आरपीएचए के सकारात्मक परिणाम की विशिष्टता की पुष्टि करने के लिए निर्धारित की जाती है जब यह संदेह में हो या विशेष महामारी विज्ञान संबंधी रुचि का हो। प्रतिक्रिया तंत्र में हेमग्लूटीनेशन का विशिष्ट निषेध शामिल होता है जब मारे गए टुलारेमिया बैक्टीरिया का निलंबन परीक्षण सीरम में जोड़ा जाता है। प्रतिक्रिया में तीन घटक परस्पर क्रिया करते हैं: परीक्षण सीरम, विशिष्ट टुलारेमिया एंटीजन और एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम आरटीपीजीए आमतौर पर 7-8 कुओं की एक पंक्ति में रखे जाते हैं। आरटीपीजीए के समानांतर दूसरा आरपीएचए स्थापित करने की सलाह दी जाती है। 0.25 मिलीलीटर पतला तरल कुओं की दो पंक्तियों में डाला जाता है, फिर 0.25 मिलीलीटर की मात्रा में परीक्षण सीरम दोनों पंक्तियों के पहले कुओं में जोड़ा जाता है और शीर्षक दिया जाता है। सीरम तनुकरण की दो समान पंक्तियाँ प्राप्त होती हैं। दूसरी पंक्ति के सभी कुओं में 0.25 मिलीलीटर पतला तरल पदार्थ डालें, और पहली पंक्ति के कुओं में 0.25 मिलीलीटर टुलारेमिया बैक्टीरिया का निलंबन डालें। टुलारेमिया डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है (प्रति 1 मिलीलीटर में 25 अरब टुलारेमिया बैक्टीरिया होते हैं), पहले 50 बार पतला किया जाता है। इस तरह के सस्पेंशन में 1 मिली में 500 मिलियन बैक्टीरिया या 0.25 मिली की मात्रा में 125 मिलियन बैक्टीरिया होते हैं। एंटीजन जोड़ने के बाद, प्लेट को कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद दोनों पंक्तियों के सभी कुओं में एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम की एक बूंद (0.05 मिली) डाली जाती है, प्लेट को हिलाया जाता है और टेबल की सपाट सतह पर छोड़ दिया जाता है। हिसाब-किताब 2-3 घंटे में हो जाता है.

आरटीपीजीए का लेखांकन और मूल्यांकन। यदि परीक्षण सीरम में विशिष्ट टुलारेमिया एंटीबॉडी होते हैं, तो उन्हें अतिरिक्त एंटीजन द्वारा बेअसर कर दिया जाता है और रक्तगुल्म कुओं की पहली पंक्ति में नहीं होगा, या, उच्च सीरम अनुमापांक के साथ, रक्तगुल्म की तुलना में कम (2-4) कुओं में देखा जाएगा। टीपीएचए के साथ पंक्ति। इस मामले में, परिणामों की विशिष्टता की पुष्टि की जाती है। यदि दोनों पंक्तियों में रक्तगुल्म का उल्लेख किया गया है, अर्थात। आरटीएचए और आरपीएचए के परिणाम मेल खाते हैं, यह परीक्षण सीरम में टुलारेमिया एंटीबॉडी की अनुपस्थिति को इंगित करता है। इस मामले में, आरपीएचए का प्राथमिक परिणाम गैर-विशिष्ट माना जाता है।

माइक्रोवॉल्यूम में आरटीपीजीए सेट करने की तकनीक। आरटीएचए, साथ ही आरपीएचए, को ताकाची-प्रकार के माइक्रोटिटर का उपयोग करके माइक्रोवॉल्यूम में निष्पादित किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, प्रत्येक 7-8 कुओं की दो पंक्तियों में माइक्रोप्लेट के कुओं में 0.25 μl पतला तरल जोड़ा जाता है। फिर, एक टिट्रेटर की मदद से, परीक्षण सीरम का 0.25 μl स्कोर किया जाता है और दोनों पंक्तियों में शीर्षक दिया जाता है। उसके बाद, पहली पंक्ति में प्रत्येक कुएं में 25 μl टुलारेमिया एंटीजन (जिसकी सांद्रता 1 मिलीलीटर में 500 मिलियन टुलारेमिया बैक्टीरिया है) और दूसरी पंक्ति में 25 μl पतला तरल जोड़ा जाता है। प्लेटों को कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद दोनों पंक्तियों के सभी कुओं में 25 μl एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (0.5% एकाग्रता) जोड़ा जाता है। परिणामों का लेखांकन और मूल्यांकन मैक्रोवॉल्यूम में प्रतिक्रिया के समान ही किया जाता है।

प्रतिक्रिया अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म(रीगा)।

आरआईजीए का उपयोग दो संस्करणों में किया जाता है: उच्च रक्तचाप का पता लगाने के लिए ज्ञात एंटीबॉडी के साथ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए ज्ञात एंटीजन के साथ। यह प्रतिक्रिया विशिष्ट है और इसका उपयोग बैक्टीरिया और रिकेट्सिया के कारण होने वाली बीमारियों के निदान के लिए किया जाता है। आरआईजीए का संचालन करने के लिए, एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है, जो अध्ययन के उद्देश्य के आधार पर एरिथ्रोसाइट्स पर एजी या एटी के सोखने द्वारा तैयार किया जाता है (चित्र 10.3)। सकारात्मक मामलों में, एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन की डिग्री को प्लसस के साथ चिह्नित किया जाता है। चार प्लस प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करते हैं, जिसमें टेस्ट ट्यूब के निचले हिस्से को कवर करने वाली चिपकी हुई एरिथ्रोसाइट्स (छाता) की एक पतली फिल्म का रूप होता है; स्कैलप्ड लेस किनारों वाली एक फिल्म की उपस्थिति दो प्लसस द्वारा इंगित की जाती है। टिटर को परीक्षण सामग्री के सीमित कमजोर पड़ने के रूप में लिया जाता है, जिससे दो प्लसस द्वारा एरिथ्रोसाइट एग्लूटीनेशन होता है।

चावल। 10.3.

1 - एरिथ्रोसाइट्स, 2 - एरिथ्रोसाइट एजी, 3 - संयुग्मित एजी, 4-एटी

आरजीए और रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (आरटीजीए)।

जैसा कि पहले ही उल्लेख किया गया है, आरजीए एरिथ्रोसाइट्स की एक साथ चिपकने की क्षमता पर आधारित है जब कुछ एंटीजन उन पर सोख लिए जाते हैं। एलांटोइक, एमनियोटिक द्रव, चिकन भ्रूण के कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली का निलंबन, वायरस से संक्रमित जानवरों की संस्कृतियों या अंगों से निलंबन और अर्क, देशी संक्रामक सामग्री का उपयोग हेमग्लूटीनेशन के लिए परीक्षण सामग्री के रूप में किया जाता है। आरजीए एक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया नहीं है, क्योंकि यह प्रतिरक्षा सीरम की भागीदारी के बिना होता है और इसका उपयोग आरटीजीए स्थापित करने या परीक्षण सामग्री में एजी (वायरस) की उपस्थिति (उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा के साथ) के लिए एजी के कामकाजी कमजोर पड़ने का चयन करने के लिए किया जाता है। प्रतिक्रिया में I (0) रक्त समूह वाले जानवरों, पक्षियों, मनुष्यों की एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है। अनुमानित आरजीए स्थापित करने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स के 5% निलंबन की एक बूंद और परीक्षण सामग्री की एक बूंद को एक ग्लास स्लाइड पर लागू किया जाता है, अच्छी तरह मिलाया जाता है। पर एक सकारात्मक परिणाम 1-2 मिनट के बाद मैक्रोस्कोपिक रूप से एरिथ्रोसाइट्स के फ्लोकुलेंट एग्लूटिनेशन की उपस्थिति का निरीक्षण करें। पॉलीस्टाइरीन प्लेटों के कुओं में एक विस्तारित पंक्ति में आरएचए स्थापित करने के लिए, 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में खारा में परीक्षण सामग्री के दोगुने बढ़ते तनुकरण तैयार किए जाते हैं। सभी परीक्षण ट्यूबों में एरिथ्रोसाइट्स के 0.25-1% निलंबन का 0.5 मिलीलीटर जोड़ा जाता है। नियंत्रण में एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण अवसादन (एरिथ्रोसाइट्स + खारा) के बाद परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। प्रतिक्रिया को एरिथ्रोसाइट तलछट की प्रकृति द्वारा ध्यान में रखा जाता है। सकारात्मक मामलों में, एग्लूटिनेशन की डिग्री को प्लसस के साथ चिह्नित किया जाता है। चार प्लस प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करते हैं, जिसमें टेस्ट ट्यूब (छाता) के निचले हिस्से को कवर करने वाली चिपकी हुई एरिथ्रोसाइट्स की एक पतली फिल्म का रूप होता है, फिल्म में अंतराल के साथ प्रतिक्रिया को तीन प्लस के साथ चिह्नित किया जाता है, स्कैलप्ड लेसी किनारों वाली एक फिल्म की उपस्थिति चिपके हुए एरिथ्रोसाइट्स का दो प्लस से संकेत मिलता है, एग्लूटीनेटेड एरिथ्रोसाइट्स के गांठों के एक क्षेत्र से घिरे एरिथ्रोसाइट्स का एक फ्लोकुलेंट तलछट एक प्लस से मेल खाता है। एक तीव्र रूप से चित्रित एरिथ्रोसाइट तलछट, जो नियंत्रण से अप्रभेद्य है, एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति को इंगित करता है। टिटर को परीक्षण सामग्री के सीमित कमजोर पड़ने के रूप में लिया जाता है, जिससे दो प्लसस द्वारा एरिथ्रोसाइट एग्लूटीनेशन होता है। यदि आरएचए परिणाम सकारात्मक है, तो प्रकार-विशिष्ट सीरा के साथ एचए आरटी का उपयोग करके पृथक वायरस के प्रकार का निर्धारण करके अध्ययन जारी रखा जाता है। आरटीजीए वायरल हेमग्लूटीनेशन को दबाने के लिए एंटीसेरम की क्षमता पर आधारित है, क्योंकि विशिष्ट एंटीबॉडी द्वारा निष्क्रिय किया गया वायरस लाल रक्त कोशिकाओं को एकत्रित करने की अपनी क्षमता खो देता है। वायरस की अनुमानित टाइपिंग के लिए ग्लास पर ड्रॉप विधि का उपयोग किया जाता है। पृथक वायरस के प्रकार की संबद्धता और सीरा में एंटीबॉडी के अनुमापन के अंतिम निर्धारण के लिए, एक विस्तारित आरटीएचए को टेस्ट ट्यूब या कुओं में रखा जाता है। इस प्रयोजन के लिए, फिजियोलॉजिकल सेलाइन में सीरा का दो गुना पतलाकरण तैयार किया जाता है और 0.25 मिलीलीटर में डाला जाता है। वायरस युक्त सामग्री की एक बूंद और एरिथ्रोसाइट्स के 1% निलंबन की एक बूंद को सीरम तनुकरण में जोड़ा जाता है। वायरस के प्रकार को निर्धारित करने के लिए आरटीजीए का उपयोग करते समय, प्रकार-विशिष्ट सीरा का उपयोग किया जाता है, जिसे एजी के कामकाजी कमजोर पड़ने की समान मात्रा में जोड़ा जाता है। पृथक वायरस के प्रकार की संबद्धता विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम द्वारा स्थापित की जाती है, जिसने इस वायरस के प्रति एंटीबॉडी का उच्चतम अनुमापांक दिखाया है। निदान के लिए आरजीए और आरटीजीए का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है विषाणु संक्रमण(टिक-जनित एन्सेफलाइटिस, इन्फ्लूएंजा, आदि) विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने और उनके एंटीजन द्वारा कई वायरस की पहचान करने के लिए।

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विभिन्न गुणों वाले घटकों की परस्पर क्रिया के दौरान एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन के साथ होने वाली घटनाओं के अनुसार सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को नामित किया जाता है। एग्लूटीनेशन, अवक्षेपण और लसीका की प्रतिक्रियाएं होती हैं।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए)

एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (आरए) विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ बातचीत करने वाले एक कॉर्पसकुलर एंटीजन (बैक्टीरिया, संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स, लेटेक्स कण, आदि का निलंबन) के उपयोग पर आधारित है, जिसके परिणामस्वरूप परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स अवक्षेपित होता है। जीवाणु संक्रमण के सीरोलॉजिकल निदान और पृथक सूक्ष्मजीवों की पहचान के लिए प्रयोगशाला अभ्यास में इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

आरए का उपयोग कई संक्रामक रोगों के निदान के लिए किया जाता है: ब्रुसेलोसिस (राइट, हेडल्सन प्रतिक्रिया), टुलारेमिया, लेप्टोस्पायरोसिस (आरएएल - लेप्टोस्पाइरा एग्लूटिनेशन और लिसीस प्रतिक्रिया), लिस्टेरियोसिस, टाइफस (आरएपी - रिकेट्सिया एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया), शिगेलोसिस, यर्सिनीओसिस, स्यूडोट्यूबरकुलोसिस, आदि।

अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, एग्लूटिनेशन (आरआईजीए या आरपीजीए) की प्रतिक्रिया।

इस प्रतिक्रिया को स्थापित करने के लिए, एंटीबॉडी या एंटीजन के साथ संवेदनशील जानवरों (भेड़, बंदर, गिनी सूअर, कुछ पक्षी) के एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन और एंटीजन या प्रतिरक्षा सीरम के समाधान के ऊष्मायन द्वारा प्राप्त किया जाता है।

एंटीजन से संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के आधार पर प्राप्त डायग्नोस्टिकम कहलाते हैं एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम. वे रक्त सीरा के क्रमिक तनुकरण में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किए गए हैं, जैसे एरिथ्रोसाइट शिगेलोसिस डायग्नोस्टिकम, एरिथ्रोसाइट साल्मोनेला ओ-डायग्नोस्टिकम।

तदनुसार, विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स पर आधारित डायग्नोस्टिक्स कहा जाता है एंटीबॉडी(इम्युनोग्लोबुलिन) डायग्नोस्टिकमऔर वे विभिन्न सामग्रियों में एंटीजन का पता लगाने के लिए काम करते हैं, उदाहरण के लिए, आरआईजीए के लिए एक एरिथ्रोसाइट इम्युनोग्लोबुलिन डिप्थीरिया डायग्नोस्टिकम, जिसका उपयोग तरल पोषक माध्यम में कोरिनेबैक्टीरिया के डिप्थीरिया एक्सोटॉक्सिन का पता लगाने के लिए किया जाता है जब नाक और ऑरोफरीनक्स से सामग्री को इसमें डाला जाता है।

हेमग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग बैक्टीरियल (टाइफाइड, पैराटाइफाइड, पेचिश, ब्रुसेलोसिस, प्लेग, हैजा, आदि) और वायरल (इन्फ्लूएंजा, एडेनोवायरस संक्रमण, खसरा, आदि) दोनों संक्रमणों के निदान के लिए किया जाता है। आरआईजीए संवेदनशीलता और विशिष्टता में आरए से बेहतर है।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (HITA)

हेमग्लूटीनेशन इनहिबिशन टेस्ट (HITA) का उपयोग रक्त सीरा में एंटीवायरल एंटीबॉडी को टाइट्रेट करने के साथ-साथ पृथक वायरल संस्कृतियों की संबद्धता के प्रकार को स्थापित करने के लिए किया जाता है। आरटीजीए का उपयोग उन वायरल संक्रमणों के निदान के लिए किया जा सकता है जिनके रोगजनकों में हेमग्लूटिनेटिंग गुण होते हैं।

विधि का सिद्धांत यह है कि एक विशिष्ट प्रकार के वायरस के प्रति एंटीबॉडी युक्त सीरम इसकी हेमग्लूटिनेटिंग गतिविधि को दबा देता है और एरिथ्रोसाइट्स गैर-एग्लूटिनेटेड रहते हैं।

निष्क्रिय रक्तगुल्म (आरटीपीजीए) के निषेध (देरी) की प्रतिक्रिया।

आरटीजीए में तीन घटक शामिल होते हैं: प्रतिरक्षा सीरम, एंटीजन (परीक्षण सामग्री) और संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स।

यदि परीक्षण सामग्री में एक एंटीजन होता है जो विशेष रूप से प्रतिरक्षा मानक सीरम के एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया करता है, तो यह उन्हें बांधता है, और सीरम के समरूप एंटीजन के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के बाद के जोड़ के साथ, हेमग्लूटीनेशन नहीं होता है।

आरटीपीएचए का उपयोग माइक्रोबियल एंटीजन का पता लगाने, उनकी मात्रा निर्धारित करने और टीपीएचए की विशिष्टता को नियंत्रित करने के लिए भी किया जाता है।

लेटेक्स एग्लूटिनेशन रिएक्शन (आरएलए)

लेटेक्स कणों का उपयोग एंटीबॉडी (इम्युनोग्लोबुलिन) के वाहक के रूप में किया जाता है। आरएलए संक्रामक रोगों के निदान के लिए एक एक्सप्रेस विधि है, इसमें लगने वाले समय (10 मिनट तक) और परीक्षण सामग्री की एक छोटी मात्रा में एंटीजन का पता लगाने की क्षमता को ध्यान में रखा जाता है।

आरएलए का उपयोग मस्तिष्कमेरु द्रव में स्ट्रेप्टोकोकस न्यूमोनिया, हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा टाइप बी, निसेरिया मेनिंगिटिडिस के एंटीजन को इंगित करने के लिए, गले के स्वाब में समूह ए स्ट्रेप्टोकोक्की का पता लगाने के लिए, साल्मोनेलोसिस, यर्सिनीओसिस और अन्य बीमारियों का निदान करने के लिए किया जाता है। विधि की संवेदनशीलता 1-10 एनजी/एमएल, या 1 μl में 10³ -10⁶ जीवाणु कोशिकाएं हैं।

जमावट प्रतिक्रिया (आरकेओए)

जमावट प्रतिक्रिया (आरकेओए) विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन संलग्न करने के लिए स्टेफिलोकोसी के प्रोटीन ए की क्षमता पर आधारित है। आरकेए - एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स की एक विधि - का उपयोग मानव रहस्यों और परिसंचारी प्रतिरक्षा परिसरों (सीआईसी) की संरचना में घुलनशील थर्मोस्टेबल एंटीजन की पहचान करने के लिए किया जाता है। सीईसी की संरचना में विशिष्ट एंटीजन का पता लगाने के लिए रक्त सीरम से उनकी प्रारंभिक वर्षा की आवश्यकता होती है।

शीघ्र प्रतिक्रिया

अवक्षेपण प्रतिक्रिया (आरपी) में, अत्यधिक फैले हुए घुलनशील एंटीजन (प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड) के साथ एंटीबॉडी की बातचीत के परिणामस्वरूप, पूरक - अवक्षेप की भागीदारी के साथ कॉम्प्लेक्स बनते हैं। यह एक संवेदनशील परीक्षण है जिसका उपयोग विभिन्न प्रकार के एंटीजन और एंटीबॉडी का पता लगाने और लक्षण वर्णन करने के लिए किया जाता है। उच्च गुणवत्ता वाले आरपी का सबसे सरल उदाहरण प्रतिरक्षा सीरम पर एंटीजन लेयरिंग की सीमा पर एक टेस्ट ट्यूब में एक अपारदर्शी वर्षा बैंड का गठन है - एक रिंग वर्षा प्रतिक्रिया। अर्ध-तरल एगर या एगरोज़ जैल (डबल इम्यूनोडिफ्यूजन विधि, रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन विधि, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस) में विभिन्न प्रकार के आरपी का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) पूरक से जुड़े हेमोलिसिस की घटना पर आधारित है, अर्थात। केवल पूरक-निर्धारण एंटीबॉडी का पता लगा सकता है।

आरएससी का व्यापक रूप से कई जीवाणु और वायरल संक्रमण, रिकेट्सियोसिस, क्लैमाइडिया, के निदान के लिए उपयोग किया जाता है। संक्रामक मोनोन्यूक्लियोसिस, प्रोटोज़ोअल संक्रमण, हेल्मिंथियासिस। आरएससी एक जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है जिसमें दो प्रणालियाँ शामिल होती हैं: परीक्षण प्रणाली (रक्त सीरम), जो एंटीजन-एंटीबॉडी और पूरक प्रणाली द्वारा दर्शायी जाती है, और हेमोलिटिक एक (भेड़ एरिथ्रोसाइट्स + हेमोलिटिक सीरम)। हेमोलिटिक सीरम रैम एरिथ्रोसाइट्स से प्रतिरक्षित खरगोश का गर्मी-निष्क्रिय रक्त सीरम है। इसमें भेड़ के एरिथ्रोसाइट्स के खिलाफ एंटीबॉडी होते हैं।

आरएसके का एक सकारात्मक परिणाम - हेमोलिसिस की अनुपस्थिति - देखा जाता है यदि परीक्षण सीरम में एंटीजन के अनुरूप एंटीबॉडी होते हैं। इस मामले में, परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स पूरक को बांधता है, और मुक्त पूरक की अनुपस्थिति में, हेमोलिटिक प्रणाली का जोड़ हेमोलिसिस के साथ नहीं होता है। सीरम में एंटीजन के अनुरूप एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का गठन नहीं होता है, पूरक मुक्त रहता है और सीरम एरिथ्रोसाइट्स के हेमोलिसिस का कारण बनता है, यानी। हेमोलिसिस की उपस्थिति प्रतिक्रिया का नकारात्मक परिणाम है।

युशचुक एन.डी., वेंगेरोव यू.वाई.ए.

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया

रक्तगुल्म प्रतिक्रिया

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया

एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (आरए) एक इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान) की उपस्थिति में एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं का एग्लूटिनेशन और अवक्षेपण है। परिणामी अवक्षेप को कहा जाता है एकत्रित होना

प्रतिक्रिया के लिए आपको चाहिए:

1. एंटीबॉडीज (एग्लूटीनिन) - रोगी के सीरम में या प्रतिरक्षा सीरम में होते हैं।

2. एंटीजन - जीवित या मारे गए सूक्ष्मजीवों, एरिथ्रोसाइट्स या अन्य कोशिकाओं का निलंबन।

3. आइसोटोनिक समाधान।

सेरोडायग्नोसिस के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से टाइफाइड बुखार, पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट प्रतिक्रिया) आदि के लिए उपयोग किया जाता है। एंटीबॉडी है रोगी का सीरम, और एंटीजन एक ज्ञात सूक्ष्म जीव है।

जब रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं की पहचान की जाती है, तो उनका निलंबन एक एंटीजन के रूप में कार्य करता है, और एक ज्ञात प्रतिरक्षा सीरम एक एंटीबॉडी के रूप में कार्य करता है। इस प्रतिक्रिया का निदान में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है आंतों में संक्रमण, काली खांसी, आदि।

प्रयोगशाला अभ्यास में, दो हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाओं (आरएचए) का उपयोग किया जाता है, जो क्रिया के तंत्र में भिन्न होते हैं।

पहला आरजीएसीरोलॉजी को संदर्भित करता है। इस प्रतिक्रिया में, एरिथ्रोसाइट्स संबंधित एंटीबॉडी (हेमाग्लगुटिनिन) के साथ बातचीत करते समय एकत्रित हो जाते हैं। रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

दूसरा आरजीएसीरोलॉजिकल नहीं है. इसमें लाल रक्त कोशिकाओं का चिपकना एंटीबॉडी के कारण नहीं, बल्कि वायरस द्वारा निर्मित विशेष पदार्थों के कारण होता है। उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा वायरस मुर्गियों और गिनी सूअरों की एरिथ्रोसाइट्स को एग्लूटीनेट करता है, पोलियो वायरस भेड़ की एरिथ्रोसाइट्स को एग्लूटीनेट करता है। यह प्रतिक्रिया परीक्षण सामग्री में किसी विशेष वायरस की उपस्थिति का आकलन करना संभव बनाती है।

यह एक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है जिसमें विशिष्ट एंटीवायरल एंटीबॉडी, वायरस (एंटीजन) के साथ बातचीत करके, इसे बेअसर कर देते हैं और इसे लाल रक्त कोशिकाओं को एकत्रित करने की क्षमता से वंचित कर देते हैं, यानी हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया को रोक देते हैं। हेमग्लूटीनेशन इनहिबिशन रिएक्शन (HITA) की उच्च विशिष्टता इसका उपयोग एचए के दौरान पाए गए प्रकार और यहां तक ​​कि वायरस के प्रकार को निर्धारित करने के लिए करने की अनुमति देती है।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) हेमग्लूटीनेशन (आरआईएचए) की प्रतिक्रिया इस तथ्य पर आधारित है कि एरिथ्रोसाइट्स, यदि एक घुलनशील एंटीजन उनकी सतह पर सोख लिया जाता है, तो सोखने वाले एंटीजन के एंटीबॉडी के साथ बातचीत करते समय एग्लूटिनेट करने की क्षमता प्राप्त कर लेते हैं। आरएनजीए योजना को अंजीर में दिखाया गया है। आरएनएचए का व्यापक रूप से कई संक्रमणों के निदान में उपयोग किया जाता है।

चावल।निष्क्रिय रक्तगुल्म (आरपीएचए) की प्रतिक्रिया की योजना। ए - एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम प्राप्त करना; बी - आरएनजीए: 1-एरिथ्रोसाइट: 2 - अध्ययन किया गया एंटीजन; 3 - एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम; 4 - अध्ययन किए गए एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी: 5 - एग्लूटीनेट।

आरएनएचए की मदद से, एक अज्ञात एंटीजन निर्धारित किया जा सकता है यदि ज्ञात एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स पर सोख लिए जाते हैं।

इन प्रतिक्रियाबुलाया अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय), चूंकि वे विभिन्न कणिका कणों की सतह पर कृत्रिम रूप से अवशोषित एजी (या एटी) का उपयोग करते हैं।

अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया (आरएनजीए, आरपीजीए) सबसे संवेदनशील सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं में से एक है। यह एटी की विभिन्न एरिथ्रोसाइट्स पर स्थिर एजी के साथ बातचीत करने की क्षमता पर आधारित है, जो एक ही समय में एग्लूटिनेट होते हैं। डायग्नोस्टिकम की अधिक स्थिरता के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को औपचारिक रूप दिया जाता है।

रिवर्स आरएनजीएरक्त सीरम में एंटीजन का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है; इसके लिए एरिथ्रोसाइट्स पर Ag नहीं, बल्कि AT तय होता है। इस प्रकार की प्रतिक्रियाओं का व्यापक रूप से संक्रामक रोगों का निदान करने, गर्भावस्था स्थापित करने, दवाओं के प्रति अतिसंवेदनशीलता का पता लगाने आदि के लिए उपयोग किया जाता है।

निष्क्रिय रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (आरटीपीजीए) - इससे आगे का विकास आरएनजीए; कुछ अर्थों में इसकी विशिष्टता को नियंत्रित करता है। भिन्न आरएनजीए, तीन घटक शामिल हैं; एजी, एटी और एजी (एटी) एरिथ्रोसाइट्स पर अधिशोषित होते हैं। प्रारंभ में, एजी एटी (मानक एंटीसेरम) के साथ प्रतिक्रिया करता है, फिर उसी एजी (या एटी) के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स को मिश्रण में जोड़ा जाता है। यदि, एटी के साथ एजी की बातचीत के दौरान, मुक्त एटी (या एजी) सिस्टम में नहीं रहता है, तो एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम का एग्लूटिनेशन नहीं देखा जाता है।