if विधि द्वारा क्या निर्धारित किया जाता है। एक सकारात्मक एलिसा परिणाम (एंजाइमी इम्यूनोएसे) का क्या अर्थ है?

सामान्य फार्माकोपियन प्राधिकरण

पहली बार पेश किया

यह जनरल फार्माकोपिया मोनोग्राफ एंजाइम इम्यूनोएसे (एलिसा) की विधि को कवर करता है। एलिसा विधि एक अत्यधिक संवेदनशील और अत्यधिक विशिष्ट इम्यूनोडायग्नोस्टिक विधि है, जिसकी मदद से एंटीजन, हैप्टेन (अपूर्ण एंटीजन) या एंटीबॉडी के गुणों वाले विभिन्न पदार्थों का गुणात्मक और मात्रात्मक निर्धारण किया जाता है। एलिसा पद्धति का व्यापक रूप से मनुष्यों और जानवरों में संक्रामक और गैर-संक्रामक रोगों के निदान के लिए उपयोग किया जाता है और इम्यूनोबायोलॉजिकल की गुणवत्ता की पुष्टि करने के लिए भी इसका उपयोग किया जा सकता है। दवाइयाँ(आईएल पी)।

विधि के सिद्धांत में एक प्रतिरक्षा परिसर के गठन के साथ एंटीबॉडी के साथ प्रतिजन की विशिष्ट बातचीत की प्रतिक्रिया और स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री, रसायन विज्ञान और अन्य पर्याप्त तरीकों का उपयोग करके परिणामी परिसर का पता लगाना शामिल है। जांच दोनों प्रत्यक्ष हो सकती है (जब परीक्षण पदार्थ में स्वयं एंजाइमेटिक गतिविधि होती है, या इसे एंजाइम लेबल के साथ लेबल किया जाता है), और अप्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष (जब ठोस चरण पर स्थिर एंटीबॉडी से बंधे परीक्षण पदार्थ को एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी के साथ इनक्यूबेट किया जाता है) ). गुणात्मक विश्लेषण आपको "हां/नहीं" सिद्धांत के अनुसार परीक्षण सामग्री में एंटीजन या एंटीबॉडी की सामग्री के बारे में जानकारी प्राप्त करने की अनुमति देता है। मात्रात्मक विश्लेषण करते समय, अंशांकन वक्र का उपयोग करके परीक्षण सामग्री में एंटीजन या एंटीबॉडी की एकाग्रता निर्धारित की जाती है।

सामान्य प्रावधान

एलिसा विधि में 3 मुख्य चरण शामिल हैं: 1) एक प्रतिरक्षा परिसर "एंटीजन (परीक्षण पदार्थ) - इसके लिए विशिष्ट एंटीबॉडी" या इसके विपरीत का गठन; 2) पिछले चरण में या मुक्त बाध्यकारी साइटों (निर्धारक) के साथ गठित प्रतिरक्षा परिसर के साथ संयुग्म बंधन का गठन; 3) एक जैव रासायनिक प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप एक एंजाइम लेबल की कार्रवाई के तहत एक रिकॉर्ड किए गए संकेत में सब्सट्रेट का परिवर्तन।

एंजाइम इम्यूनोएसे करने के सभी तरीकों को सजातीय या विषम के रूप में वर्गीकृत किया गया है।

तकनीक जिसमें एलिसा के सभी 3 चरण समाधान में होते हैं, और मुख्य चरणों के बीच अप्रतिक्रिया वाले घटकों से गठित प्रतिरक्षा परिसरों को अलग करने के लिए कोई अतिरिक्त चरण नहीं होते हैं, सजातीय एलिसा विधियों के समूह से संबंधित हैं। सजातीय एलिसा का आधार, जो आमतौर पर कम आणविक भार पदार्थों को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है, एंजाइम की गतिविधि को बाधित करने की प्रक्रिया है जब इसे एंटीजन या एंटीबॉडी के साथ जोड़ा जाता है। एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, एंजाइम की गतिविधि बहाल हो जाती है। जब एक एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स युक्त एक एंजाइम लेबल बनता है, एंजाइम गतिविधि एक उच्च आणविक भार सब्सट्रेट के संबंध में 95% से बाधित होती है, जो एंजाइम के सक्रिय केंद्र से सब्सट्रेट के स्टेरिक बहिष्कार के कारण होती है। जैसे-जैसे एंटीजन की सांद्रता बढ़ती है, अधिक से अधिक एंटीबॉडी बंधते हैं, और अधिक से अधिक मुक्त एंटीजन-एंजाइम संयुग्म बनाए जाते हैं जो उच्च आणविक भार सब्सट्रेट को हाइड्रोलाइज कर सकते हैं। सजातीय एलिसा विधि बहुत तेज है। एक परिभाषा का विश्लेषण करने में 1 मिनट का समय लगता है। विधि की संवेदनशीलता काफी अधिक है। इसके साथ, आप पदार्थ को पिकोमोल के स्तर पर निर्धारित कर सकते हैं।

विषम तरीकों के लिए, एक ठोस चरण की भागीदारी के साथ दो-चरण प्रणाली में विश्लेषण करने के लिए विशिष्ट है - वाहक और प्रतिरक्षा परिसरों को अप्राप्य घटकों (धोने) से अलग करने का चरण जो विभिन्न चरणों में हैं (परिणामस्वरूप प्रतिरक्षा) कॉम्प्लेक्स ठोस चरण में हैं, और अप्रतिबंधित कॉम्प्लेक्स समाधान में हैं) अनिवार्य है। विषम विधियाँ, जिसमें पहले चरण में प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण ठोस चरण पर होता है, ठोस-चरण विधियाँ कहलाती हैं।

विधियों को सजातीय-विषम के रूप में वर्गीकृत किया जाता है यदि पहला चरण - विशिष्ट परिसरों का निर्माण - समाधान में होता है, और फिर घटकों को अलग करने के लिए एक स्थिर अभिकर्मक के साथ एक ठोस चरण का उपयोग किया जाता है।

विषम एलिसा विधि में 3 मुख्य चरण होते हैं:

• एक ठोस चरण पर एंटीजन या एंटीबॉडी का स्थिरीकरण, परिणामी परिसर को इम्यूनोसॉर्बेंट कहा जाता है;
• अनबाउंड अभिकर्मक को हटाना और ब्लॉकिंग प्रोटीन जैसे एल्ब्यूमिन, कैसिइन के साथ ठोस समर्थन पर बाध्यकारी साइटों को अवरुद्ध करना; उनके बाध्यकारी होने के लिए इम्युनोसॉरबेंट के साथ विश्लेषण की गई तैयारी का ऊष्मायन;

3) परीक्षण पदार्थ की एंजाइमेटिक गतिविधि के कारण या विश्लेषित तैयारी (डायरेक्ट वेरिएंट) से जुड़े एंजाइमैटिक लेबल के कारण पता लगाना। कुछ मामलों में, एक एंजाइमैटिक लेबल के साथ संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ "इम्युनोसॉर्बेंट-टेस्ट पदार्थ" कॉम्प्लेक्स का एक अतिरिक्त ऊष्मायन किया जाता है (अप्रत्यक्ष संस्करण)।

उपयोग किए गए डिटेक्टर के लिए उपयुक्त एक सब्सट्रेट जोड़कर और एक मानक नमूने के साथ विश्लेषण के संकेत की तुलना करके विश्लेषण का मात्रात्मक निर्धारण किया जाता है।

विषम एलिसा की विधि को गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा और प्रतिस्पर्धी एलिसा में विभाजित किया गया है। परख योजनाओं को आवश्यक आवश्यकताओं के अनुसार एक औषधीय उत्पाद के विकास के दौरान संशोधित किया जा सकता है। परिवर्तनों को मोनोग्राफ या नियामक दस्तावेज में इंगित किया जाना चाहिए। एलिसा पद्धति का चुनाव परीक्षण पदार्थ की प्रकृति और उसकी मात्रा पर निर्भर करता है, क्योंकि अलग - अलग प्रकारएलिसा की अलग-अलग संवेदनशीलता होती है। एंटीबॉडी युक्त पदार्थों की गुणवत्ता का आकलन करने के लिए, विशिष्ट एंटी-इडियोटाइपिक एंटीबॉडी का उपयोग करना संभव है।

गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा विधि

गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा विधि को पहचान के प्रकार (प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी, अप्रत्यक्ष (अप्रत्यक्ष) प्रतिस्पर्धी) और ठोस चरण (एंटीजन या एंटीबॉडी) पर स्थिर पदार्थ के प्रकार के अनुसार कई प्रकारों में बांटा गया है।

प्रत्यक्ष एलिसा

2 प्रकार से किया जा सकता है। पहले मामले में, परीक्षण पदार्थ (एंटीजन) सीधे ठोस चरण पर स्थिर होता है; फिर एंटीजन से जुड़ा लेबल एंटीबॉडी डिटेक्टर है। परीक्षण को अलग तरीके से करते समय, ठोस चरण पर स्थिर एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, डिटेक्टर एंजाइम के साथ लेबल किया गया परीक्षण पदार्थ है।

अप्रत्यक्ष (अप्रत्यक्ष) एलिसा संस्करण

एलिसा के एक अप्रत्यक्ष रूप का प्रदर्शन करते समय, प्रतिजन ठोस चरण पर स्थिर हो जाता है। अवरुद्ध करने के बाद, इसके लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का समाधान प्रतिजन में जोड़ा जाता है। ऊष्मायन के बाद, परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को अनबाउंड एंटीबॉडी से धोया जाता है और एंजाइम-लेबल एंटी-इम्युनोग्लोबुलिन (एंटी-आईजी) जोड़ा जाता है, जो एक डिटेक्टर के रूप में कार्य करता है। एंटी-आईजी डिटेक्टर व्यावसायिक रूप से विशिष्ट आईजी वर्गों और उपवर्गों के लिए उपलब्ध हैं, जो इस परख प्रारूप को एंटीबॉडी आइसोटाइपिंग के लिए सुविधाजनक बनाते हैं। इसके अलावा, लेबल किए गए एंटी-आईजी का उपयोग प्रत्यक्ष एलिसा की तुलना में संकेत को बढ़ाता है, जिससे परख की संवेदनशीलता बढ़ जाती है।

एलिसा के एक प्रकार के रूप में सैंडविच विधि

सबसे आम गैर-प्रतिस्पर्धी विधि "सैंडविच" विधि है। जब यह ठोस चरण पर किया जाता है, प्राथमिक एंटीबॉडी उनके बाद के अवरुद्ध होने के साथ स्थिर हो जाते हैं। फिर, एंटीजन युक्त परीक्षण पदार्थ को उनमें जोड़ा जाता है और इनक्यूबेट किया जाता है। ऊष्मायन के बाद, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को अनबाउंड एंटीजन से धोया जाता है, एंजाइम के साथ लेबल किए गए द्वितीयक एंटीबॉडी जोड़े जाते हैं, और पता लगाया जाता है।

प्रतिस्पर्धी एलिसा विधि

प्रतिस्पर्धी एलिसा पद्धति को कई प्रकारों में विभाजित किया गया है: पहचान के प्रकार के अनुसार (प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी, अप्रत्यक्ष (अप्रत्यक्ष) प्रतिस्पर्धी) और ठोस चरण (एंटीजन या एंटीबॉडी) पर स्थिर पदार्थ के प्रकार के अनुसार।

प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी एलिसा

घुलनशील प्रतिजनों का पता लगाने या उनकी मात्रा निर्धारित करने के लिए, ठोस चरण पर स्थिर प्रतिजन के साथ एक प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी एलिसा का उपयोग किया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक उपयुक्त डिटेक्टर के साथ संयुग्मित प्रतिजन-विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करें (उदाहरण के लिए, हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज, क्षारविशिष्ट फ़ॉस्फ़टेज़, रूथेनियम या फ्लोरेसिन)। मानक प्रतिजन को ठोस चरण पर स्थिर किया जाता है, इसके बाद अवरुद्ध किया जाता है। एंजाइम-लेबल वाले एंटीबॉडी को टेस्ट पदार्थ (घुलनशील एंटीजन) के साथ इनक्यूबेट किया जाता है। फिर इस मिश्रण को इमोबिलाइज्ड एंटीजन में जोड़ा जाता है, इनक्यूबेट किया जाता है, और फिर अनबाउंड एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से धोया जाता है। अगला कदम लेबल किए गए एंजाइम के लिए उपयुक्त सब्सट्रेट जोड़ना है। प्रतिस्पर्धी घुलनशील एंटीजन के बिना नियंत्रण नमूने की तुलना में सिस्टम में 2 एंटीजन की उपस्थिति के कारण प्रतिक्रिया का अवरोध, परीक्षण पदार्थ की मात्रा के मूल्य के व्युत्क्रमानुपाती होता है।

एक ठोस चरण पर स्थिर एंटीबॉडी के साथ एक प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी एलिसा का प्रदर्शन एक प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी एलिसा के समान है, जिसमें एक ठोस चरण पर एक प्रतिजन स्थिर होता है, लेकिन इसका उपयोग एंटीबॉडी का पता लगाने या इसकी मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

अप्रत्यक्ष (अप्रत्यक्ष) प्रतिस्पर्धी एलिसा

यह एलिसा विधि प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी संस्करण के समान है, हालांकि, एक लेबल वाले एंटीबॉडी या एंटीजन के बजाय, एक लेबल वाले एंटी-आईजी अभिकर्मक या लेबल वाले माध्यमिक एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए क्रमशः उपयोग किया जाता है।

विधि के लिए सामान्य शर्तेंएलिसा

एंजाइम इम्यूनोएसे के लिए एक ठोस चरण के रूप में विभिन्न सामग्रियों का उपयोग किया जाता है: सिलिकॉन, नाइट्रोसेल्युलोज, पॉलियामाइड्स, पॉलीस्टाइनिन, पॉलीविनाइल क्लोराइड, पॉलीप्रोपाइलीन, ऐक्रेलिक और अन्य। ठोस चरण एक टेस्ट ट्यूब, 96-वेल और अन्य प्लेट्स, गेंदों, मोतियों के साथ-साथ नाइट्रोसेल्यूलोज और अन्य झिल्ली की दीवारें हो सकती हैं जो प्रोटीन को सक्रिय रूप से अवशोषित करती हैं। स्थिरीकरण का सिद्धांत (हाइड्रोफोबिक, हाइड्रोफिलिक, सहसंयोजक बातचीत) ठोस चरण की पसंद पर निर्भर करता है। सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला ठोस चरण 96-अच्छी तरह से प्लास्टिक माइक्रोटिटर प्लेटें हैं। प्लेट में कुओं की संख्या भिन्न हो सकती है। प्लेट पारदर्शी (रंगमिति पहचान) और अपारदर्शी (रसायनयुक्त पहचान, फ्लोरीमेट्री) हो सकती है।

स्थिरीकरण कुएं में हवा के बुलबुले के बिना किया जाना चाहिए, क्योंकि उनकी उपस्थिति ऑप्टिकल घनत्व रीडिंग को बदल देती है। बायोटिनाइलेटेड स्थिरीकृत अभिकर्मकों का उपयोग करना संभव है। इस मामले में, प्रतिक्रिया में स्ट्रेप्टाविडिन और एक बायोटिनिलेटेड एंजाइम लेबल का उपयोग किया जाता है। इस विधि का उपयोग सिग्नल को बढ़ाने के लिए किया जाता है। स्थिरीकरण का समय और तापमान, अभिकर्मक की गतिज प्रकृति, स्थिरता और एकाग्रता के आधार पर, मोनोग्राफ और मानक प्रलेखन में इंगित किया जाना चाहिए।

एंजाइम इम्यूनोएसे के सभी चरणों, धुलाई और अवरुद्ध समाधान, प्रत्येक चरण के लिए समय अंतराल और तापमान की स्थिति, एक प्रकार के बरतन पर ऊष्मायन के लिए प्रति मिनट क्रांतियों की संख्या, पता लगाने की स्थिति भी मोनोग्राफ और नियामक प्रलेखन में इंगित की जानी चाहिए।

कुछ प्रकार के एलिसा के तरीकों के उदाहरण

अप्रत्यक्ष गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा विधि

1. प्रतिजन का अवशोषण।एंटीजन के 0.1-0.5 माइक्रोग्राम और 0.05 एम कार्बोनेट-बाइकार्बोनेट बफर समाधान (पीएच 9.6) के 100 μl को 96-वेल प्लेट के प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है, जब तक अन्यथा मोनोग्राफ या मानक दस्तावेज में इंगित नहीं किया जाता है, और फिर के तापमान पर सोखना 16 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस उच्च पीएच मान वाले अन्य बफर समाधान का उपयोग किया जा सकता है। ऊष्मायन एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाकर किया जाता है।

अनबाउंड एंटीजन अणुओं की धुलाई (डबल) फॉस्फेट-बफर खारा समाधान (पीएच 9.0) के साथ किया जाता है जिसमें 0.1% ट्वीन-20 (300 μl प्रति कुएं) होता है, जब तक कि अन्यथा फार्माकोपियोअल मोनोग्राफ या नियामक प्रलेखन में इंगित नहीं किया जाता है।

1. अवरुद्ध करना।एंटीजन या एंटीबॉडी के गैर-विशिष्ट बंधन की साइटों को अवरुद्ध करने के लिए, प्लेट के कुओं को फॉस्फेट-बफर खारा समाधान (पीएच 9.0) या फार्माकोपियोअल मोनोग्राफ में निर्दिष्ट एक अन्य बफर समाधान या 1% समाधान वाले नियामक दस्तावेज में भर दिया जाता है। गोजातीय सीरम एल्बुमिन या अन्य प्रोटीन (कैसिइन, जिलेटिन, पाउडर दूध, आदि), और कमरे के तापमान पर 10-15 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है (जब तक अन्यथा मोनोग्राफ या मानक दस्तावेज में इंगित नहीं किया जाता है)।

तृतीय। विशिष्ट एंटीबॉडी का अनुमापन।यदि मात्रा का ठहराव आवश्यक है, तो परीक्षण पदार्थ (एंटीजन या एंटीबॉडी) को मानक नमूने (RS) के साथ समानांतर में सीरियल कमजोर पड़ने में अनुमापित किया जाता है।

अनुमापन प्लेट की क्षैतिज और ऊर्ध्वाधर दोनों पंक्तियों में किया जा सकता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एंटीबॉडी अनुमापन किया जाता है यदि एंटीबॉडी की इष्टतम एकाग्रता का चयन करना या उनके अनुमापांक का निर्धारण करना आवश्यक है। इस घटना में कि एंटीबॉडी का इष्टतम एकाग्रता और / या टिटर निर्धारित किया जाता है, फिर इन एंटीबॉडी (सीरम) के लिए अनुशंसित कमजोर पड़ने का उपयोग किया जाता है।

अनुमापन करते समय, एंटीबॉडी का एक तैयार-निर्मित कमजोर पड़ने को पंक्ति के पहले कुएं में पेश किया जाता है - प्रति कुएं में औसतन 1-10 μg, फिर कुओं में एंटीबॉडी का क्रमिक कमजोर पड़ने का प्रदर्शन किया जाता है। एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाने के साथ कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया जाता है।

फॉस्फेट-बफर खारा समाधान पीएच 9.0 का उपयोग करके कम से कम 3-4 बार धुलाई की जाती है जिसमें 0.1% ट्वीन -20 होता है।

1. एक एंजाइम लेबल के साथ संयुग्मित एंटीस्पेसिस (एंटीग्लोबुलिन) एंटीबॉडी का जोड़।एंजाइमैटिक लेबल के साथ संयुग्मित एंटी-प्रजाति पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग डिटेक्टर (द्वितीयक) एंटीबॉडी के रूप में किया जाता है। अधिकतर, बकरी या खरगोश एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है, पूरे अणु के लिए विशिष्ट या विशिष्ट एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े के लिए। डिटेक्टर एंटीबॉडी की एकाग्रता आमतौर पर निर्माता द्वारा स्टॉक समाधान (उदाहरण के लिए, 1:1000) के कमजोर पड़ने के रूप में इंगित की जाती है।

क्षैतिज प्लेट शेकर पर मिलाते हुए कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए द्वितीयक लेबल वाले एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया जाता है।

0.1% ट्वीन-20 युक्त फॉस्फेट-बफर खारा घोल (पीएच 9.0) का उपयोग करके कम से कम 3-4 बार धुलाई की जाती है।

ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए किया जाता है और एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाया जाता है।

1. सब्सट्रेट समाधान के 100 μl कुओं में जोड़े जाते हैं और लगातार सरगर्मी के साथ कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है। एंजाइमी प्रतिक्रिया को रोकने के लिए, एक "स्टॉप रिएजेंट" का उपयोग किया जाता है, जिसे सभी परीक्षण और नियंत्रण नमूनों में समान मात्रा में जोड़ा जाता है। सबसे अधिक बार, सल्फ्यूरिक एसिड का उपयोग "स्टॉप रिएजेंट" के रूप में किया जाता है।

प्रत्यक्ष गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा विधि

अप्रत्यक्ष गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा की विधि से प्रत्यक्ष एलिसा की विधि में केवल मामूली अंतर है। इस प्रकार, चरण I और II दोनों प्रकार के विश्लेषणों में समान हैं। अंतर इस तथ्य में निहित है कि चरण III में एलिसा के प्रत्यक्ष संस्करण में, परीक्षण प्रतिजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है, एक एंजाइम लेबल के साथ संयुग्मित होता है, और वे सीधे परीक्षण पदार्थ के साथ बातचीत करते हैं। यदि आवश्यक हो, तो संयुग्मों को उसी तरह से टाइट्रेट करना भी संभव है जैसा कि पहले गैर-संयुग्मित एंटीबॉडी के लिए वर्णित है। चरण IV प्रत्यक्ष गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा के ढांचे में नहीं किया जाता है।

"सैंडविच" विधि एलिसा

एलिसा का यह संस्करण अध्ययन के तहत एंटीजन के स्थानिक रूप से दूर एपिटोप्स के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी (प्राथमिक और माध्यमिक) की एक जोड़ी का उपयोग करता है।

1. ठोस चरण पर एंटीबॉडी का अवशोषण।एंटीजन सोखने की विधि "अप्रत्यक्ष गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा" खंड में एंटीबॉडी के सोखने की विधि के समान है।
2. अवरुद्ध करना।सब्सट्रेट (ठोस चरण) पर गैर-विशिष्ट बाध्यकारी साइटों को अवरुद्ध करने की तकनीक "अप्रत्यक्ष गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा" खंड में वर्णित अवरुद्ध तकनीक के समान है।

तृतीय। प्रतिजन के साथ ऊष्मायन।परीक्षण पदार्थ के 50 μl और एंटीजन के मानक कमजोर पड़ने को टैबलेट के कुओं में पूर्व-शोषित एंटीबॉडी के साथ जोड़ा जाता है, जब तक कि अन्यथा मोनोग्राफ या मानक दस्तावेज में इंगित नहीं किया जाता है। 0.1% ट्वीन-20 युक्त फॉस्फेट बफर सलाइन (पीएच 9.0) के साथ एंटीजन तनुकरण तैयार किया जाना चाहिए, क्योंकि ट्वीन-20 प्रोटीन अणुओं के गैर-विशिष्ट बंधन को एक-दूसरे से और प्लेट की सतह से कम कर देता है। प्रत्येक प्रोटीन कमजोर पड़ने के लिए 2 (3) कुओं का उपयोग करके एक क्षैतिज पंक्ति (या 3 प्रतिकृति) में आसन्न कुओं के लिए परीक्षण पदार्थ और मानक एंटीजन कमजोर पड़ने वाले जोड़े जोड़े जाते हैं।

ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए लगातार सरगर्मी के साथ किया जाता है। धुलाई कम से कम 3-4 बार फॉस्फेट-बफर खारा समाधान (पीएच 9.0) के साथ किया जाता है जिसमें 0.1% ट्वीन-20 होता है, या मोनोग्राफ या नियामक दस्तावेज में निर्दिष्ट एक अन्य बफर समाधान होता है।

1. एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन।एक एंजाइम लेबल के साथ संयुग्मित विशिष्ट एंटीबॉडी के समाधान के 100 μl टैबलेट के कुओं में जोड़े जाते हैं। संयुग्मित एंटीबॉडी की इष्टतम एकाग्रता, एक नियम के रूप में, मोनोग्राफ या नियामक दस्तावेज में इंगित की जाती है (आमतौर पर 2-4 माइक्रोग्राम / एमएल की एकाग्रता का उपयोग किया जाता है)।

क्षैतिज प्लेट शेकर पर मिलाते हुए कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया जाता है।

धुलाई कम से कम 3–4 बार फॉस्फेट-बफर खारा घोल (पीएच 9.0) का उपयोग करके किया जाता है जिसमें 0.1% ट्वीन-20 होता है, या मोनोग्राफ या नियामक दस्तावेज में निर्दिष्ट एक अन्य बफर समाधान होता है।

1. एक रंगीन उत्पाद की उपस्थिति के साथ, एक एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया करना।एक एंजाइमी प्रतिक्रिया करने की प्रक्रिया खंड में वर्णित प्रक्रिया के समान है: "अप्रत्यक्ष गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा विधि"।

का पता लगाने

जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, एक एंजाइम लेबल या अन्य अभिकर्मक के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। एंजाइम लेबल हो सकता है, उदाहरण के लिए, हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज, क्षारीय फॉस्फेट या गैलेक्टोसिडेज़। अन्य लेबल वाले एंटीबॉडी या एंटीजन को डिटेक्टर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। डिटेक्शन रिएजेंट का चुनाव एंटीबॉडी या एंटीजन से संयुग्मित लेबल के प्रकार और डिटेक्शन विधि पर निर्भर करता है।

पता लगाने के तरीकों के रूप में, लेबल की पसंद के आधार पर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री, केमिलुमिनेसेंस, फ्लोरोमेट्री और अन्य तरीकों का उपयोग किया जा सकता है।

मात्रात्मक एलिसा पद्धति के परिणाम

मात्रात्मक एलिसा विधि के परिणामों की गणना उलटा प्रतिगमन के साथ एक रेखीय अंशांकन वक्र से या उलटा प्रतिगमन के साथ एक गैर-रैखिक अंशांकन वक्र का उपयोग करके एक जटिल विधि का उपयोग करके की जाती है। परिणामों की व्याख्या करने की विधि एलिसा को सेट करने के लिए उपयोग की जाने वाली विधि पर निर्भर करती है। उदाहरण के लिए, एक अंशांकन वक्र का उपयोग करके परीक्षण के परिणामों से, आप अज्ञात नमूने की एकाग्रता का मूल्यांकन कर सकते हैं, अवरोध या प्रभावी एकाग्रता की अर्ध-अधिकतम एकाग्रता का मूल्यांकन कर सकते हैं। यह आपको संदर्भ/अंशांकन मानक (RS) की तुलना में परीक्षण पदार्थ की मात्रा या उसकी गतिविधि का निर्धारण करने की अनुमति देता है। आमतौर पर, मात्रात्मक एलिसा विधि का प्रदर्शन करते समय अंशांकन वक्र का रूप, जो विश्लेषण की गई दवा की एकाग्रता की विशेषता है, गैर-रैखिक रूप से गणना किए गए औसत मूल्य पर निर्भर करता है। इस संबंध में, प्राप्त वक्र का विश्लेषण करने के लिए विभिन्न गणितीय मॉडल का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है। अन्य मामलों में, विधि की संवेदनशीलता के भीतर नमूने में किसी विशेष परीक्षण पदार्थ की उपस्थिति का आकलन करने के लिए एलिसा पद्धति का उपयोग गुणात्मक विधि के रूप में किया जाता है।

टिप्पणी।

कार्बोनेट बाइकार्बोनेट बफर समाधान की तैयारी (पीएच 9,6). 1.59 ग्राम सोडियम कार्बोनेट (निर्जल) या 4.29 ग्राम सोडियम कार्बोनेट 10-जलीय और 2.93 ग्राम सोडियम बाइकार्बोनेट को 1000 मिलीलीटर की क्षमता वाले मापने वाले सिलेंडर में जोड़ा जाता है, जिसे 800 मिलीलीटर शुद्ध पानी में घोल दिया जाता है, पीएच को 9.6 में समायोजित किया जाता है , हिलाया, फिर घोल की मात्रा को शुद्ध पानी के निशान पर लाएँ और फिर से मिलाएँ।

(एलिसा) विशेष कोशिकाओं की खोज के आधार पर प्रयोगशाला में रक्त परीक्षण की एक विधि है - एंटीबॉडी विभिन्न रोग. विधि न केवल रोगज़नक़ की पहचान करने की अनुमति देती है, बल्कि यह भी स्थापित करती है कि रोग प्रक्रिया किस स्तर पर है। उत्तरार्द्ध रोग का निदान और रोगी के आगे के उपचार के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।

विधि के फायदे और नुकसान

इन सब में आधुनिक तरीकेडायग्नोस्टिक एलिसा सबसे नवीन और तकनीकी रूप से सटीक है। इसके मुख्य लाभ हैं:

1. रोगी के रक्त में संक्रामक रोगों के सभी मौजूदा एंटीबॉडी की खोज करने की क्षमता।
2. अनुसंधान पद्धति की उच्च उपलब्धता। आज, एलिसा विश्लेषण किसी भी मध्यम आकार की प्रयोगशाला द्वारा किया जा सकता है।
3. विधि की लगभग 100% विशिष्टता और संवेदनशीलता।
4. एंटीबॉडी और एंटीजन की खोज करने की क्षमता, साथ ही मंच की स्थापना पैथोलॉजिकल प्रक्रियाऔर इसकी गतिशीलता को ट्रैक करना, मात्रा की तुलना के लिए धन्यवाद।

अन्य परीक्षणों की तुलना में इस तरह के कई फायदे पूरी तरह से विश्लेषण की एकमात्र खामी को खत्म कर देते हैं: यह एंटीबॉडी का पता लगाने में सक्षम है, लेकिन स्वयं रोगज़नक़ का नहीं।

विश्लेषण के मूल्यांकन के लिए बुनियादी शर्तें

यह समझने के लिए कि एलिसा विश्लेषण क्या है, यह क्या है और इसे कैसे किया जाता है, आपको विशेषज्ञों द्वारा उपयोग की जाने वाली मूल शर्तों से परिचित होने की आवश्यकता है।

1. एंटीबॉडी- एक प्रोटीन जो मानव प्रतिरक्षा प्रणाली (टाइप बी लिम्फोसाइट्स) की कोशिकाओं द्वारा निर्मित होता है। वे एक विदेशी एजेंट या पदार्थ के अंतर्ग्रहण के लिए एक विशिष्ट प्रतिक्रिया के साथ प्रतिक्रिया करते हैं। एंटीबॉडी का दूसरा नाम इम्युनोग्लोबुलिन है, वे विभिन्न वर्गों से संबंधित हैं: ए, ई, एम, जी। वे द्रव्यमान, प्रतिक्रिया की गति, आधा जीवन और कई अन्य विशेषताओं में एक दूसरे से भिन्न होते हैं। आम तौर पर, मानव रक्त में मुख्य रूप से वर्ग जी इम्युनोग्लोबुलिन होते हैं। यदि कोई संक्रमण होता है, तो इम्युनोग्लोबुलिन ए और एम की मात्रा तेजी से बढ़ जाती है। इम्युनोग्लोबुलिन ई एलर्जी प्रतिक्रियाओं में शामिल होते हैं।
2. एंटीजन- कार्बनिक मूल और उच्च आणविक भार का एक विदेशी एजेंट। बहुधा ये रोगजनक या उनके जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ होते हैं।
3. एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स, या प्रतिरक्षा परिसर, सीधे एक विदेशी पदार्थ और एक इम्युनोग्लोबुलिन का संयोजन होता है, जो एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को जन्म देता है।

विधि का सार और दायरा

मरीजों के पास अक्सर एक प्रश्न होता है: एलिसा विश्लेषण, यह क्या है, यह कैसे किया जाता है और यह किस लिए है? आप इसके चरणों का संक्षेप में वर्णन करके विधि के बारे में सुलभ तरीके से बात कर सकते हैं।

तैयारी का चरण. लैब डॉक्टर 96 कुओं के साथ एक विशेष प्लेट का उपयोग करता है। प्रत्येक कुएं की सतह पर एक विशिष्ट रोगज़नक़ का एक प्रतिजन लगाया जाता है।

प्रथम चरणरक्त लिया जाता है, जिसे फिर बूंद-बूंद करके कुएं में डाला जाता है। कुआं रक्त में एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच प्रतिक्रिया शुरू करता है।

चरण 2कुएं में, प्रतिरक्षा परिसरों के गठन के साथ प्रतिक्रिया जोरों पर है। नतीजतन, एक निश्चित रंग का पदार्थ बनता है। रंग की तीव्रता प्रत्येक विशिष्ट रोगज़नक़ के लिए रोगी के रक्त में एंटीबॉडी की मात्रा पर निर्भर करती है।

स्टेज 3फोटोमेट्री द्वारा परिणाम का मूल्यांकन। इसके लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर नामक एक विशेष उपकरण का उपयोग किया जाता है। यह कुएं और नियंत्रण नमूने में सामग्री के घनत्व की तुलना करता है। इसके अलावा, डिवाइस गणितीय विश्लेषण द्वारा परिणाम उत्पन्न करता है।

एलिसा के परिणामों और उद्देश्य का मूल्यांकन

परिणाम की व्याख्या कई महत्वपूर्ण बारीकियों पर निर्भर करती है:

1. कुएं का ऑप्टिकल घनत्व।
2. खैर प्लेट निर्माता (परीक्षण प्रणाली)।
3. प्रयोगशाला जहां अध्ययन किया गया था।

इन बारीकियों को देखते हुए, आपको कभी भी अलग-अलग परीक्षण प्रणालियों या अलग-अलग प्रयोगशालाओं के दो परिणामों की तुलना नहीं करनी चाहिए।

एक अन्य महत्वपूर्ण बिंदु जो एलिसा के विश्लेषण को प्रभावित करता है, वह एंटीबॉडी की तथाकथित अम्लता है। यह पैरामीटर एंटीजन की मात्रा, एंटीजन-एंटीबॉडी परिसर में बंधन की ताकत को दर्शाता है। इसकी परिभाषा प्रोटीन संरचनाओं को हल करने के लिए यूरिया के साथ प्रतिरक्षा जटिल के उपचार पर आधारित है। यह आपको एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच कमजोर बंधनों को नष्ट करने और केवल मजबूत लोगों को छोड़ने की अनुमति देता है। उत्सुकता के लिए अध्ययन का महत्व इस तथ्य में निहित है कि इसका उपयोग संक्रमण की अवधि का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। गर्भवती महिलाओं के निदान के लिए यह जानकारी अत्यंत महत्वपूर्ण है।

एक एलिसा रक्त परीक्षण निम्न कार्य करता है:

1. रोगजनकों के विभिन्न प्रतिजनों की खोज करने के लिए।
2. हार्मोनल पृष्ठभूमि का अध्ययन करने के लिए।
3. एक स्व-प्रतिरक्षित बीमारी की उपस्थिति के लिए परीक्षण करने के लिए।
4. मार्करों का पता लगाने के लिए ऑन्कोलॉजिकल रोग.

एलिसा की किस्में

एलिसा विश्लेषण की निम्नलिखित किस्में हैं:

1. अप्रत्यक्ष।
2. सीधा।
3. प्रतिस्पर्द्धी।
4. अवरोधक विधि।

लेकिन वास्तव में, आज केवल एलिसा (एंजाइम लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट एसे) नामक एक विधि का उपयोग किया जाता है। यह कुएं की सतह पर रंग परिवर्तन के साथ एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन की उपरोक्त वर्णित प्रतिक्रिया पर आधारित है।

प्रत्यक्ष मात्रात्मक एलिसा रक्त परीक्षण विशेष ध्यान देने योग्य है। यह एक प्रकार का विश्लेषण नहीं है, बल्कि परिणामों के मूल्यांकन का एक तरीका है। उसके लिए धन्यवाद, एंटीबॉडी की संख्या की गणना की जाती है और उनकी कक्षाएं निर्धारित की जाती हैं। परिणाम नमूने के ऑप्टिकल घनत्व पर निर्भर करता है, परीक्षण प्रणाली जिस पर एलिसा प्रदर्शन किया गया था, और प्रयोगशाला पर भी।

एलिसा द्वारा पता लगाए गए रोग

एलिसा एक रक्त परीक्षण है जो आपको बड़ी संख्या में विभिन्न संक्रामक रोगों की पहचान करने की अनुमति देता है। इसके अलावा, वायरल और बैक्टीरियल दोनों बीमारियों का समान सटीकता के साथ पता लगाया जाता है। उदाहरण के लिए, प्रतिरक्षा परिसरों के गठन की सहायता से, निम्न रोगों के प्रेरक एजेंटों के प्रतिजनों की उपस्थिति को साबित करना संभव है:

इसके अलावा, एलिसा आपको पता लगाने की अनुमति देता है:

1. कैंसर मार्कर - TNF (ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर), PSA (प्रोस्टेट-विशिष्ट एंटीजन), CEA (कैंसर-भ्रूण एंटीजन), CA-125 (डिम्बग्रंथि ट्यूमर मार्कर)
2. गर्भावस्था हार्मोन एचसीजी (मानव कोरियोनिक गोनाडोट्रोपिन) है।
3. उल्लंघन प्रजनन प्रणाली: महिला और पुरुष प्रजनन प्रणाली के हार्मोन।
4. थायरॉयड ग्रंथि की पैथोलॉजी।

यह उल्लेख करना महत्वपूर्ण है कि एचआईवी के लिए एलिसा परीक्षण आज इस खतरनाक बीमारी का निदान करने का मुख्य तरीका है।

एलिसा सामग्री और नमूनाकरण तकनीक

एलिसा करने के लिए मरीज का खून खाली पेट लिया जाता है। इसके अलावा, रक्त से सीरम प्राप्त किया जाता है, जिसका उपयोग सीधे विश्लेषण के लिए किया जाता है। इसके अलावा, एलिसा मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ), ग्रीवा नहर (गर्भाशय ग्रीवा) के बलगम, एमनियोटिक द्रव और यहां तक ​​कि तरल पर भी किया जा सकता है। नेत्रकाचाभ द्रव(नेत्रगोलक)।

रक्तदान करने से पहले, रोगी को चेतावनी दी जाती है कि उसे कोई दवा नहीं लेनी चाहिए, और एंटीबायोटिक दवाओं के साथ इलाज करना चाहिए एंटीवायरल ड्रग्सरक्त के नमूने लेने से कम से कम दो सप्ताह पहले समाप्त करने की सिफारिश की जाती है।

परिणामों की प्राप्ति और व्याख्या की शर्तें

प्रयोगशाला से प्रतिक्रिया प्राप्त करने का समय उसके काम की गति पर निर्भर नहीं करता है, बल्कि रोग के चरण पर और रक्त में पहले से ही कौन से एंटीबॉडी दिखाई दे चुके हैं। इसलिए, उदाहरण के लिए: इम्युनोग्लोबुलिन एम विश्लेषण के लिए रक्त लेने के लगभग 2 सप्ताह बाद दिखाई देता है और इसका मतलब है कि यह प्रक्रिया प्राथमिक संक्रमण के स्तर पर है या पुरानी बीमारी का प्रकोप हुआ है। इसी समय, प्राथमिक संक्रमण के दौरान वर्ग एम और जी के एंटीबॉडी दिखाई देते हैं। इसके अलावा, बाद वाले का पता 4 सप्ताह के बाद लगाया जा सकता है।

IgA 2-3 सप्ताह के बाद या तो अकेले या M के साथ दिखाई देता है, एक तीव्र संक्रमण का संकेत देता है, या G के साथ मिलकर, एक पुरानी प्रक्रिया का संकेत देता है।

ऐसा अलग-अलग तिथियांरक्त में एंटीबॉडी की उपस्थिति से रोगी को परिणाम के लिए लंबा इंतजार करना पड़ेगा। एलिसा विश्लेषण किए जाने के बाद एक महीने से अधिक प्रतीक्षा करना स्वीकार्य है। डॉक्टर द्वारा डिकोडिंग और इंटरप्रिटेशन में भी एक निश्चित समय लगता है।

प्रगति के साथ आधुनिक दवाईरोगी में कुछ विकृतियों के संदेह के मामले में अधिक गहराई से निदान करना संभव है। सूचनात्मक तरीकों में से एक प्रयोगशाला अनुसंधानएलिसा विश्लेषण था, जो शिरापरक रक्त लेने की विधि द्वारा किया जाता है। यानी मरीज के लिए समग्र रूप से कुछ भी नहीं बदलता है। लेकिन एलिसा प्रयोगशाला सहायक एकत्रित बायोमटेरियल का अध्ययन करने के लिए एक जटिल तकनीक का संचालन करता है। एलिसा विश्लेषण क्या हैं और एलिसा पद्धति का निदान के रूप में उपयोग करने की सूक्ष्मताएं क्या हैं, हम नीचे दी गई सामग्री को समझते हैं।

एक एंजाइम इम्यूनोएसे क्या है?

एंटीबॉडी का उत्पादन स्वयं एंटीजन द्वारा उकसाया जाता है जो मानव शरीर में प्रवेश कर चुके हैं। शरीर के स्वास्थ्य के लिए "लड़ाई" में प्रवेश करते समय, एंटीबॉडी, जैसा कि थे, खुद को एंटीजन के साथ चिह्नित करते हैं, जिसे प्रयोगशाला सहायक रक्त परीक्षण में देखता है। यही है, एकत्रित बायोमटेरियल में, न केवल संक्रमण की उपस्थिति को ट्रैक करना संभव है, बल्कि शरीर के पूरी तरह से ठीक होने के बाद इसके निशान भी हैं।

इस प्रकार, असाइन करना लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परखरोगी को रक्त, उपस्थित चिकित्सक संक्रमण की अवधि, इसकी प्रगति की डिग्री को ट्रैक कर सकता है या किसी विशेष संक्रमण के लिए प्रतिरक्षा की उपस्थिति की पहचान कर सकता है।

एलिसा डायग्नोस्टिक प्रक्रिया इस तरह दिखती है:

• लिया गया शिरापरक रक्त प्रयोगशाला में रक्त सीरम की स्थिति में लाया जाता है;
• फिर प्रयोगशाला सहायक कोशिकाओं के साथ एक विशेष ट्रे का उपयोग करता है, जिनमें से प्रत्येक में पहले से ही सभी आवश्यक एंटीजन होते हैं। यह प्रत्येक कोशिका में रक्त सीरम को गिराने और प्रतिजनों के लिए इम्युनोग्लोबुलिन (एंटीबॉडी) की प्रतिक्रिया को ट्रैक करने के लिए पर्याप्त है। अध्ययन के तहत सामग्री के रंग में बदलाव से "वांछित" प्रतिक्रिया की उपस्थिति का संकेत मिलता है। भविष्य में, प्रयोगशाला सहायक अध्ययन के तहत माध्यम के ऑप्टिकल घनत्व का अध्ययन करता है।

• एस्कारियासिस और एंटरोबियासिस (राउंडवॉर्म और पिनवॉर्म);
• ट्राइकिनोसिस;
• तीव्र और जीर्ण रूपों में ओपीसिथोरियासिस;
• जियार्डियासिस;
• अमीबायोसिस;
• टोक्सोप्लाज़मोसिज़;
• लीशमैनियासिस किसी भी रूप में।

महत्वपूर्ण: एंजाइम इम्यूनोएसे गुणात्मक और मात्रात्मक दोनों हो सकते हैं। पहले मामले में, प्रयोगशाला सहायक केवल रक्त में वांछित पदार्थ की उपस्थिति की पुष्टि या खंडन करता है। दूसरे मामले में, विश्लेषण के परिणामस्वरूप, रोगी के शरीर में इसकी एकाग्रता का संकेत मिलता है।

विधि के नुकसान

इस निदान पद्धति के सभी लाभों के साथ, यह समझा जाना चाहिए कि एक एंजाइम इम्यूनोएसे रोगी की बीमारी का कारण खोजने का एक तरीका नहीं है, बल्कि उपस्थित चिकित्सक द्वारा कथित निदान की पुष्टि करने का एक तरीका है। और इस तथ्य को ध्यान में रखते हुए कि अध्ययन काफी महंगा है, इसे बुद्धिमानी से इस्तेमाल किया जाना चाहिए। इस मामले में, अध्ययन के परिणामों की व्याख्या केवल एक योग्य विशेषज्ञ द्वारा की जानी चाहिए।

परिणामों की व्याख्या करना

संक्षिप्त नाम IFA और यह क्या है, इसे समाप्त करने के बाद ─ पता चला, यह परिणामों की व्याख्या करने के लिए आगे बढ़ने लायक है। यहाँ यह समझना आवश्यक है कि यदि विश्लेषण गुणात्मक रूप से किया गया तो परिणाम सकारात्मक या नकारात्मक ही होगा। यही है, निदान या तो किसी विशेष निदान के बारे में डॉक्टर के संदेह की पुष्टि करता है, या उनका खंडन करता है। इस स्थिति में, फॉर्म में क्रमशः "+" या "-" चिन्ह होंगे।

महत्वपूर्ण: एक नकारात्मक परीक्षा परिणाम हमेशा संक्रमण की अनुपस्थिति का संकेत नहीं देता है। तथ्य यह है कि एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी संक्रमण के 14 दिनों के भीतर बन सकते हैं और संभावना है कि वे अभी तक नहीं बने हैं।

यदि एक मात्रात्मक विश्लेषण किया जाता है, तो एंटीबॉडी के प्रकार, उनकी संख्या और गतिविधि का चरण यहां निर्धारित किया जाता है। विशेष रूप से, इस तरह के निदान के साथ, एंटीबॉडी (इम्युनोग्लोबुलिन) आईजीजी और आईजीएम निर्धारित होते हैं, जो संक्रमण की प्रगति के विभिन्न अवधियों में बनते हैं। इस मामले में सबसे आम परिणाम हैं:

• ऊंचा आईजीएम और आईजीजी की पूर्ण अनुपस्थिति। यह तस्वीर हाल के संक्रमण और पैथोलॉजी के तीव्र चरण को इंगित करती है।
• दोनों प्रकार के इम्युनोग्लोबुलिन (IgM और IgG) की गतिविधि में वृद्धि। वह संक्रामक प्रक्रिया के दीर्घकालिक और जीर्ण पाठ्यक्रम की बात करता है।
• आईजीजी गतिविधि और आईजीएम की पूर्ण अनुपस्थिति। संक्रमण कम से कम छह महीने पहले था और अब वायरस एक लंबी पुरानी अवस्था में है।
• आईजीजी और आईजीए एंटीबॉडी की अनुपस्थिति। परिणाम अपरिभाषित है।
• आईजीएम, आईजीए और आईजीजी एंटीबॉडी की अनुपस्थिति। एक विशिष्ट संक्रमण के लिए प्रतिरक्षा की कमी का संकेत देता है।
• IgG, IgM और IgA एंटीबॉडी की गतिविधि एक पुरानी प्रक्रिया के तेज होने का संकेत देती है।

एंटीबॉडी के प्रकार की पहचान करने के अलावा, प्रपत्र के एक विशेष कॉलम में प्रयोगशाला सहायक प्रति रक्त मात्रा में उनकी संख्या भी इंगित करता है। याद रखें, यह समझने के बाद कि एलिसा पद्धति क्या है, परिणामों की स्वयं व्याख्या न करें। प्राप्त परिणामों की व्याख्या केवल उपस्थित चिकित्सक द्वारा की जा सकती है, जो प्रस्तावित निदान के आधार पर बनाया गया है नैदानिक ​​तस्वीररोगी पर।

अक्सर अभ्यास में, ठोस चरण इम्यूनोसे के तीन रूपों का उपयोग किया जाता है - अप्रत्यक्ष इम्यूनोसे, प्रत्यक्ष इम्यूनोसे और सैंडविच-प्रकार इम्यूनोसे। इस प्रकार के इम्युनोसेज़ के बीच अंतर इस प्रकार हैं। इम्यूनोएसे के अप्रत्यक्ष संस्करण में, एंटीजन को पहले चरण में एक पॉलीस्टायरीन प्लेट के कुओं की सतह पर सोख लिया जाता है। अनबाउंड एंटीजन अणुओं को हटाने के बाद, उस एंटीजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी वाला एक नमूना जोड़ा जाता है। परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी परिसरों को एक लेबल (छवि 1 ए) से संयुग्मित एंटी-प्रजाति एंटीबॉडी का उपयोग करके पता लगाया जाता है। इम्यूनोएसे के प्रत्यक्ष संस्करण में, adsorbed एंटीजन का पता सीधे लेबल (चित्र 1B) के साथ संयुग्मित विशिष्ट एंटीबॉडी की मदद से किया जाता है। एक सैंडविच-प्रकार के इम्यूनोएसे में, पहले चरण में, यह एंटीजन नहीं है जो प्लेट की सतह पर सोख लिया जाता है, लेकिन अध्ययन के तहत एंटीजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी (सब्सट्रेट एंटीबॉडी)। अनबाउंड एंटीबॉडी अणुओं को हटाने के बाद, एंटीजन युक्त एक नमूना जोड़ा जाता है। गठित सब्सट्रेट-एंटीजन एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता लगाने के लिए, दूसरे के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी, स्थानिक रूप से दूर एंटीजन एपिटोप, कुछ लेबल के साथ संयुग्मित, जोड़े जाते हैं (चित्र। 1 बी)। एक इम्यूनोएसे में एक एंटीजन के दो अलग-अलग एपिटोप्स के लिए विशिष्ट सैंडविच-प्रकार के एंटीबॉडी का उपयोग रक्त प्लाज्मा जैसे विषम नमूनों में भी एंटीजन का निर्धारण करने में उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता प्राप्त करना संभव बनाता है।

चावल। 1. अप्रत्यक्ष (ए), प्रत्यक्ष (बी) और सैंडविच-प्रकार इम्यूनोसे (सी) का सिद्धांत

अप्रत्यक्ष एंजाइम इम्यूनोएसे (अप्रत्यक्ष एलिसा)

अप्रत्यक्ष इम्यूनोसे की विधि को 3-चरण की प्रक्रिया के कार्यान्वयन की विशेषता है, जिसके पहले चरण में एंटीजन को विशेष रूप से तैयार प्लास्टिक पर सोख लिया जाता है, दूसरे चरण में विशिष्ट एंटीबॉडी एंटीजन के साथ परस्पर क्रिया करते हैं, और तीसरे चरण में एंटीजन -प्रजातियों के एंटीबॉडी को सिस्टम में पेश किया जाता है, एक एंजाइम के साथ संयुग्मित होता है जो संकेतक एंजाइमी प्रतिक्रिया को निर्धारित करता है। इस विधि में हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज का उपयोग एंजाइम के रूप में किया जाता है। प्रतिक्रिया विशेष 96-वेल प्लेटों में की जाती है ।

I. प्रतिजन सोखना

इम्यूनोएसे के लिए 96-वेल प्लेट के कुओं में फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) के 100 μl में एंटीजन 0.1-0.5 माइक्रोग्राम प्रति कुएं को अवशोषित करते हैं। ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए किया जाता है और एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाया जाता है। 0.1% ट्वीन-20 (पीबीएसटी) युक्त फॉस्फेट-बफर खारा के साथ अनबाउंड एंटीजन अणुओं की धुलाई (2-गुना) की जाती है।

द्वितीय। अवरुद्ध

गैर-विशिष्ट बाध्यकारी साइटों को ब्लॉक करने के लिए, टैबलेट के कुओं को पीबीएसटी से भर दिया जाता है और कमरे के तापमान पर 10-15 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।

तृतीय। विशिष्ट एंटीबॉडी का धुंधला हो जाना

स्क्रीनिंग टैबलेट की क्षैतिज और लंबवत दोनों पंक्तियों में की जा सकती है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एंटीबॉडी ट्रिट्यूरेशन किया जाता है यदि एंटीबॉडी की इष्टतम एकाग्रता का चयन करना या टिटर निर्धारित करना आवश्यक है। इस घटना में कि एंटीबॉडी का इष्टतम एकाग्रता और / या टिटर निर्धारित किया जाता है, फिर इन विशिष्ट एंटीबॉडी के लिए अनुशंसित कमजोर पड़ने का उपयोग किया जाता है।

ट्रिट्यूरेटिंग करते समय, एंटीबॉडी के तैयार कमजोर पड़ने को पंक्ति के पहले कुएं में पेश किया जाता है - प्रति कुएं में औसतन 1-10 μg, फिर कुओं में एंटीबॉडी का क्रमिक कमजोर पड़ने का काम किया जाता है। कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया जाता है और एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाया जाता है। पीबीएसटी से 3 बार धुलाई की जाती है।

चतुर्थ। एक एंजाइम लेबल के साथ संयुग्मित एंटी-प्रजाति एंटीबॉडी का जोड़

डिटेक्टर (द्वितीयक) एंटीबॉडी के रूप में, हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज के साथ संयुग्मित एंटी-प्रजाति पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। अधिकतर, बकरी या खरगोश एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है, पूरे अणु के लिए विशिष्ट या विशिष्ट एंटीबॉडी के एफसी अंशों के लिए। पता लगाने वाले एंटीबॉडी की एकाग्रता आमतौर पर निर्माता द्वारा स्टॉक समाधान (उदाहरण के लिए, 1: 1000) के कमजोर पड़ने के रूप में इंगित की जाती है। कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया जाता है और एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाया जाता है। 5-6 बार पीबीएसटी से धुलाई की जाती है।

हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ सब्सट्रेट ऑक्सीकरण की प्रतिक्रिया को उत्प्रेरित करता है। O-फेनिलिडेनमाइन (OPD) का उपयोग हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज के लिए एक सब्सट्रेट के रूप में किया जाता है। प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, एक रंगीन ओपीडी ऑक्सीकरण उत्पाद बनता है।

सब्सट्रेट समाधान: सब्सट्रेट बफर के 10 मिलीलीटर (0.1 एम ना-साइट्रेट बफर, पीएच 4.5) में 30% हाइड्रोजन पेरोक्साइड के 0.01 मिलीलीटर और 50x ओएफडी समाधान के 0.2 मिलीलीटर (इथेनॉल के 10 मिलीलीटर में 340 मिलीग्राम ओएफडी) जोड़ें; -20 पर स्टोर करें डिग्री सेल्सियस)।

ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए किया जाता है और एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाया जाता है।

वी। एंजाइमेटिक रिएक्शन रोकना

छठी। ऑप्टिकल घनत्व माप

प्रत्यक्ष एंजाइम इम्यूनोएसे (प्रत्यक्ष एलिसा)

अप्रत्यक्ष इम्यूनोसे की विधि की तुलना में प्रत्यक्ष इम्यूनोसे की विधि में केवल मामूली अंतर है। इस प्रकार, चरण I और II दोनों प्रकार के विश्लेषणों में समान हैं। अंतर इस तथ्य में निहित है कि चरण III इम्यूनोएसे के प्रत्यक्ष संस्करण में, एंजाइम लेबल के साथ संयुग्मित विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। यदि आवश्यक हो, तो एंजाइम लेबल के साथ संयुग्मित विशिष्ट एंटीबॉडी का ट्रिट्यूरेशन करना भी संभव है, इसी तरह गैर-संयुग्मित एंटीबॉडी के लिए पहले वर्णित है। स्टेज IV को छोड़ दिया गया है, और आगे के चरणों (V-VII) को उसी तरह से किया जाता है जैसा कि इम्यूनोसे के अप्रत्यक्ष रूप के लिए ऊपर वर्णित है।

सैंडविच-प्रकार इम्यूनोएसे

चावल। 2. "सैंडविच"-टाइप इम्यूनोएसे का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। एटीपी सब्सट्रेट एंटीबॉडी है, एटीडी डिटेक्शन एंटीबॉडी है, एजी एंटीजन है, एम पहचान एंटीबॉडी के लिए सहसंयोजक रूप से बाध्य लेबल है, पी वह सब्सट्रेट है जिस पर सब्सट्रेट एंटीबॉडी का विज्ञापन किया जाता है।

इम्युनोसे (अंजीर। 2) के इस प्रकार में, अध्ययन किए गए प्रतिजन के स्थानिक रूप से दूर के एपिटोप्स के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की एक जोड़ी का उपयोग किया जाता है।

I. सब्सट्रेट के लिए एंटीबॉडी का अवशोषण

इम्यूनोएसे के लिए 96-वेल प्लेट के कुओं में फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) के 100 μl में एंटीबॉडी सब्सट्रेट 1-2 माइक्रोग्राम प्रति कुएं को अवशोषित करते हैं। ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए किया जाता है और एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाया जाता है। 0.1% ट्वीन-20 (पीबीएसटी) युक्त फॉस्फेट-बफर खारा के साथ अनबाउंड एंटीजन अणुओं की धुलाई (2-गुना) की जाती है।

द्वितीय। अवरुद्ध

गैर-विशिष्ट बाध्यकारी साइटों को ब्लॉक करने के लिए, कुओं को पीबीएसटी से भर दिया जाता है और कमरे के तापमान पर 10-15 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।

तृतीय। प्रतिजन के साथ ऊष्मायन

परीक्षण समाधान के 50 μl या प्रतिजन के मानक dilutions preadsorbed एंटीबॉडी के साथ टैबलेट के कुओं में योगदान करते हैं। एंटीजन कमजोर पड़ने को पीबीएसटी से तैयार किया जाना चाहिए क्योंकि ट्वीन-20 प्रोटीन अणुओं के एक-दूसरे से और प्लेट की सतह पर गैर-विशिष्ट बंधन को कम करता है। प्रत्येक प्रोटीन कमजोर पड़ने के लिए दो (तीन) कुओं का उपयोग करके परीक्षण समाधान और एंटीजन के मानक कमजोर पड़ने वाले जोड़े (या 3 प्रतिकृति) जोड़े जाते हैं। ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए लगातार सरगर्मी के साथ किया जाता है। पीबीएसटी समाधान के साथ 3 बार धुलाई की जाती है।

चतुर्थ। एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन

एक एंजाइम लेबल के साथ संयुग्मित विशिष्ट एंटीबॉडी के समाधान के 100 μl टैबलेट के कुओं में जोड़े जाते हैं। संयुग्मित एंटीबॉडी की इष्टतम एकाग्रता आमतौर पर निर्माता द्वारा निर्दिष्ट की जाती है (आमतौर पर 2-4 माइक्रोग्राम / एमएल की एकाग्रता का उपयोग किया जाता है)। एक एंजाइम लेबल वाले एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए किया जाता है और एक क्षैतिज प्लेट शेकर पर हिलाया जाता है। 5-6 बार पीबीएसटी से धुलाई की जाती है।

वी। एक रंगीन उत्पाद की उपस्थिति के साथ, एक एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया करना

सब्सट्रेट समाधान के 100 μl कुओं में जोड़े जाते हैं और लगातार सरगर्मी के साथ कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है।

छठी। एंजाइमी प्रतिक्रिया रोकना

ऑप्टिकल घनत्व को मापने से पहले, रंग प्रतिक्रिया 0.5 एम एच 2 एसओ 4 के साथ रोक दी जाती है। ऊष्मायन के बाद, ओएफडी कार्यशील समाधान के साथ कुओं में 0.5 एम सल्फ्यूरिक एसिड समाधान के 50 μl जोड़े जाते हैं। उसके बाद, आप तुरंत ऑप्टिकल घनत्व मापना शुरू कर सकते हैं।

सातवीं। ऑप्टिकल घनत्व माप

रंगीन उत्पाद समाधान के ऑप्टिकल घनत्व को प्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके λ=490 एनएम पर मापा जाता है।

मानक की सूची में नैदानिक ​​उपायसंक्रामक रोगों के लिए प्रयुक्त एंजाइम इम्यूनोएसे शामिल हैं। यदि सिफलिस के लिए एलिसा पॉजिटिव है, तो तुरंत घबराएं नहीं।

आइए हम इस शोध पद्धति की विशेषताओं और इसमें प्राप्त परिणामों को समझने के सिद्धांतों पर अधिक विस्तार से विचार करें विभिन्न श्रेणियांरोगियों।

संक्रामक रोगों के निदान के लिए एंजाइम इम्यूनोएसे सबसे आम तरीकों में से एक है। यह ट्रेपोनेमल परीक्षणों की श्रेणी से संबंधित है, अर्थात, इसका उपयोग रोगी के शरीर में सिफलिस के प्रेरक एजेंट - पेल ट्रेपोनेमा की उपस्थिति को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।

एलिसा द्वारा, ट्रेपोनिमा के लिए एंटीबॉडी का पता लगाने के कारण सिफलिस का पता लगाया जाता है। वे रोगी के रक्त में निहित होते हैं, और उनका प्रकार और मात्रा रोग के चरण और रूप पर निर्भर करते हैं, जो आपको प्राप्त करने की अनुमति देता है महत्वपूर्ण सूचनामानव स्वास्थ्य की वर्तमान स्थिति के बारे में।

फायदे और नुकसान

एलिसा को अक्सर संदिग्ध उपदंश या अन्य के लिए निर्धारित किया जाता है संक्रामक रोग. यह इस तथ्य के कारण है कि विश्लेषण आपको रोग के सटीक प्रकार और चरण की पहचान करने की अनुमति देता है, और इसकी विश्वसनीयता उच्च स्तर पर बनी हुई है - कई अध्ययनों के परिणामों के आधार पर त्रुटि की संभावना केवल 1% है, प्राथमिक एलिसा लगभग 90% की सटीकता है।

उच्च-गुणवत्ता वाले अभिकर्मकों और आधुनिक उपकरणों का उपयोग हमें संकेतकों की सटीकता को अधिकतम करने की अनुमति देता है।

सामान्य तौर पर, विधि के फायदे हैं:

1. परिणाम की उच्च सटीकता. गलत डेटा प्राप्त करने की संभावना बहुत कम है।
2. प्रभाव के मानव कारक का न्यूनतमकरण।एलिसा के संचालन के लिए आधुनिक उपकरण प्रक्रिया के स्वचालन के कारण अध्ययन के परिणामों पर मानवीय प्रभाव को बाहर करता है।
3. विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाना. एक प्रकार के एंटीजन को दूसरों के साथ भ्रमित करना असंभव है, इसलिए विश्लेषण एक विशिष्ट निदान के लिए सटीक परिणाम दिखाता है।
4. मानदंड से मामूली विचलन को ठीक करना. यहां तक ​​कि पैथोलॉजिकल एजेंटों की सबसे छोटी सांद्रता पर किसी का ध्यान नहीं जाएगा।

इस पद्धति की कमजोरियों के बारे में मत भूलना। एलिसा के निम्नलिखित नुकसान हैं:

1. उच्च कीमत। उच्च लागत कई कारकों के कारण है, विशेष रूप से, पर्याप्त स्तर के प्रशिक्षण के साथ अच्छे उपकरण, उच्च गुणवत्ता वाले अभिकर्मकों और विशेषज्ञों की आवश्यकता।
2. प्रारंभिक निदान की आवश्यकता। आपको यह जानने की जरूरत है कि कौन से एंटीजन की तलाश की जाए, क्योंकि अतिरिक्त डेटा के बिना एक सटीक निदान करना असंभव होगा।
3. झूठे सकारात्मक परिणाम की संभावना। शरीर की कुछ स्थितियाँ और अन्य कारक अंतिम डेटा को विकृत कर सकते हैं।

किए जाने के संकेत

डॉक्टर न केवल सिफलिस, बल्कि कई अन्य संक्रामक रोगों के निदान के लिए एक एंजाइम इम्यूनोसे लिख सकते हैं।

यदि हम ट्रेपोनिमा के संक्रमण से सीधे स्थिति पर विचार करते हैं, तो परीक्षा का कारण हो सकता है:

• रोग के बाहरी लक्षणों की उपस्थिति (चक्कर, सिफिलिटिक दाने, गम, आदि);
• प्रतिरक्षा में महत्वपूर्ण कमी;
• यौन साथी, रिश्तेदारों और परिवार के सदस्यों में उपदंश की पहचान या संदेह;
• अन्य परीक्षणों के दौरान सकारात्मक प्रतिक्रिया;
• सिफलिस से जुड़ी अन्य बीमारियों की पहचान;
• एक व्यक्ति की व्यक्तिगत इच्छा की जांच की जानी चाहिए।

करने के तरीके

एलिसा किया जा सकता है विभिन्न तरीके. प्रत्येक मामले में, सबसे उपयुक्त विकल्प चुना जाता है।

सबसे पहले, विधियों का एक विभाजन है:

1. गुणात्मक। मरीज के शरीर में किसी संक्रमण या वायरस की मौजूदगी का पता चलता है।
2. मात्रात्मक। मानव शरीर में एक रोगजनक एजेंट को एंटीबॉडी की एकाग्रता निर्धारित करता है, जो रोग के विकास की अवस्था और तीव्रता को इंगित करता है।

आवश्यक प्रतिक्रिया को पुन: उत्पन्न करने के सिद्धांत के अनुसार एलिसा के संचालन के तरीकों का वर्गीकरण भी है।

3 विकल्प हैं:

1. सीधा. लेबल किए गए एंटीबॉडी को प्रदान किए गए रक्त के नमूनों में इंजेक्ट किया जाता है।
2. एंटीजन के साथ अप्रत्यक्ष।एलिसा के लिए बनाई गई पॉलीस्टायरीन प्लेट की कोशिकाओं में पहले से सोखे गए प्रतिजनों को रखा जाता है। फिर उनमें वायरस के एंटीबॉडी जोड़े जाते हैं, जो परिणामों के आगे के मूल्यांकन के लिए आवश्यक प्रतिरक्षा परिसरों के गठन को भड़काते हैं।
3. एंटीबॉडी के साथ अप्रत्यक्ष।यौन संचारित रोगों के लिए, इस विधि का प्रयोग अक्सर किया जाता है। इसमें एंटीबॉडी का प्रारंभिक सोखना शामिल है, उसके बाद ही एंटीजन को प्लेट में जोड़ा जाता है।

सामग्री नमूनाकरण नियम

झूठे परिणाम प्राप्त करने के जोखिम को कम करने के लिए, सही ढंग से विश्लेषण के लिए रक्तदान करना आवश्यक है।

एलिसा से गुजरने से पहले, कुछ प्रतिबंधों का पालन करना चाहिए:

• तीव्र शारीरिक और भावनात्मक तनाव से बचें;
• कम से कम 1 से 3 दिन पहले धूम्रपान और शराब पीना छोड़ दें;
• कुछ दिनों के लिए आपको उचित पोषण पर स्विच करने की जरूरत है;
• मासिक धर्म चक्र के चरण को नियंत्रित करने के लिए महिलाओं के लिए यह वांछनीय है, क्योंकि हार्मोन परिणामों को विकृत कर सकते हैं;
• अंतिम भोजन रक्तदान से 8-10 घंटे पहले होना चाहिए;
• 10 दिनों के लिए, अध्ययन के परिणामों को प्रभावित करने वाली दवाओं को बाहर रखा गया है।

एलिसा के लिए क्यूबिटल नस से शिरापरक रक्त लिया जाता है, इसे सुबह खाली पेट लेना चाहिए। सामान्य तौर पर, शिरापरक रक्त के नमूने की तैयारी के लिए मानक नियम लागू होते हैं। किस बीमारी का परीक्षण किया जा रहा है, इसके आधार पर अतिरिक्त आवश्यकताएं लागू हो सकती हैं। प्रारंभिक तैयारीमरीज़।

क्रियाविधि

एलिसा कराने के निर्देश काफी सरल हैं:

1. रोगी एक नस से रक्त लेता है।
2. ली गई सामग्री तैयार की जा रही है और एक विशेष फाइन-मेश पैलेट पर नमूनों में विभाजित की जा रही है।
3. चुनी हुई विधि के अनुसार एंटीजन को एंटीबॉडी के साथ मिलाया जाता है।
4. प्रतिक्रिया का मूल्यांकन किया जाता है। नमूनों की तुलना नियंत्रण नमूनों से की जाती है, परिणामों का गुणात्मक और मात्रात्मक मूल्यांकन किया जाता है।
5. मात्रात्मक संकेतकों (कुल एंटीबॉडी) के आवेदन के साथ डेटा को एक विशेष तालिका में दर्ज किया गया है।
6. उपस्थित चिकित्सक परिणामों की व्याख्या करता है। यदि आवश्यक हो, उचित उपचार निर्धारित है।

परीक्षा के बाद, रोगी को परिणामों के साथ एक दस्तावेज दिया जाता है। यह संक्रामक रोगों के नाम के साथ चौराहे पर प्रत्येक प्रकार के इम्युनोग्लोबुलिन के विपरीत संबंधित पदनामों के साथ एक तालिका का रूप है।

डिक्रिप्शन

केवल एक विशेषज्ञ ही विश्लेषण के परिणामों को सही ढंग से समझने में सक्षम होगा। उदाहरण के लिए, ELISA k = 1 4 के परिणाम का क्या मतलब है, यह अपने आप पता लगाना मुश्किल है। सिफलिस विभिन्न रूपों में भी हो सकता है, जो अंतिम डेटा को भी प्रभावित करता है।

परिणाम 3 प्रकार के इम्युनोग्लोबुलिन का संकेत देते हैं:

1. आईजीएम. उपदंश के साथ संक्रमण की अवधि निर्धारित करने की अनुमति दें। एक सकारात्मक परिणाम रोग के तेज होने का संकेत देता है। उनकी अनुपस्थिति पुरानी विकृति या रोग के एक अव्यक्त रूप की छूट का संकेत दे सकती है।
2. आईजीए।एक ऐसी बीमारी का संकेत देता है जो संक्रमण के एक महीने से अधिक पुरानी है। यह रोग के तीव्र चरण का भी संकेत है, दोनों सामान्य विकृतियों और उन्नत पुरानी दोनों के साथ।
3. आईजीजी. यह बीमारी के चरम काल का संकेत है, यानी इसका गहरा होना। उपदंश के साथ, उपचार के कुछ समय बाद एक सकारात्मक प्रतिक्रिया दिखाई देती है। कुछ प्रकार की बीमारियों में यह विकसित रोग प्रतिरोधक क्षमता का संकेत हो सकता है।

ये पदार्थ शरीर द्वारा एक निश्चित क्रम में उत्पन्न होते हैं, जो रोग का एक अतिरिक्त संकेत है। गुणात्मक परीक्षणों के साथ, प्रत्येक प्रकार के रक्त में केवल इम्युनोग्लोबुलिन की उपस्थिति स्थापित होती है।

यह विश्लेषण में शामिल सामग्रियों के रंग में परिवर्तन में व्यक्त किया गया है। मात्रात्मक संकेतक सहायक होते हैं, वे स्थिति का अधिक सटीक वर्णन करते हैं। एंटीजन और एंटीबॉडी का अनुपात रोग की गंभीरता और शरीर की प्रतिक्रिया की तीव्रता को दर्शाता है।

क्या करें

यदि रोगी को वास्तव में सिफलिस है, तो एक सकारात्मक एलिसा का हमेशा पता लगाया जाता है, इस तरह के अध्ययन में ट्रेपोनेमा की उपस्थिति पर ध्यान नहीं देना असंभव है। निराशा न करें, रोग उपचार के लिए अच्छी तरह से प्रतिक्रिया करता है, खासकर प्रारंभिक अवस्था में।

टेस्ट का परिणाम पॉजिटिव आने पर क्या करें:

• डॉक्टर के संकेत के अनुसार अतिरिक्त परीक्षाओं से गुजरना;
• चुनी हुई योजना के अनुसार एंटीबायोटिक चिकित्सा का एक कोर्स करें;
• प्रतिरक्षा प्रणाली को मजबूत करने पर ध्यान दें;
• रोग के बारे में अपने यौन साथी को सूचित करें;
• भविष्य में, नियमित रूप से डिस्पेंसरी में अपंजीकरण (सकारात्मक परीक्षण परिणामों की अनुपस्थिति में 5 साल बाद) तक निवारक निदान से गुजरना होगा।

बीमार छुट्टी को स्थगित करने और परिणामों को सार्वजनिक करने से डरने की कोई आवश्यकता नहीं है। निदान एन्क्रिप्ट किया गया है और गुप्त रहता है, केवल अगर अन्य लोगों को संक्रमण का खतरा है, तो रिश्तेदारों और यौन साथी को समस्या के बारे में सूचित करना आवश्यक है ताकि वे आवश्यक परीक्षाओं से गुजरें।

गलत सकारात्मक परिणाम और इसके कारण

कभी-कभी अन्य परीक्षणों का परिणाम दर्ज किया जाता है और एलिसा सिफलिस के लिए झूठी सकारात्मक होती है। इसीलिए इसे 2 - 3 करने की सलाह दी जाती है सहायक तरीकेऔर थोड़ी देर बाद एंजाइम इम्यूनोएसे को दोहराएं।

ऐसी अशुद्धियाँ दुर्लभ हैं, वे मुख्य रूप से ऐसे कारकों के कारण होती हैं:

• गर्भावस्था;
• पुराने रोगों;
• हाल ही में टीकाकरण;
• चोट।

गलत-सकारात्मक परिणामों को तीव्र और जीर्ण में विभाजित किया जाता है, जो उस कारक की प्रकृति पर निर्भर करता है जिसने उन्हें उकसाया।

मुख्य तालिका में प्रस्तुत किए गए हैं:

इन स्वास्थ्य समस्याओं के लिए, सिफलिस टेस्ट दिखा सकता है सकारात्मक परिणाम, लेकिन यह बीमारी से लड़ने के लिए शरीर द्वारा प्रोटीन के उत्पादन का केवल एक परिणाम है। हालाँकि, एलिसा उन्हें एंटीजन के रूप में पहचानती है।

यदि एक महिला गर्भावस्था के दौरान सिफलिस से संक्रमित थी, तो डेढ़ वर्ष तक के स्वस्थ बच्चे को गलत सकारात्मक एलिसा परिणाम का अनुभव हो सकता है। इस उम्र से पहले, रक्त के पास खुद को पूरी तरह से नवीनीकृत करने का समय नहीं होता है, इसलिए इसमें मां के एंटीबॉडी मौजूद हो सकते हैं। अपवाद आईजीएम इम्युनोग्लोबुलिन का पता लगाने की स्थिति है।

आप इस लेख में वीडियो देखकर एंजाइम इम्यूनोएसे की विशेषताओं और इसकी कार्यप्रणाली के बारे में अधिक जान सकते हैं।