Využíva erytrocyty alebo neutrálne syntetické materiály (napríklad latexové častice), na ktorých povrchu sa adsorbujú antigény (bakteriálne, vírusové, tkanivové) alebo protilátky. K ich aglutinácii dochádza po pridaní príslušných sér alebo antigénov. RBC senzibilizované antigénmi sa nazývajú antigénne erytrocytové diagnosticum a používajú sa na detekciu a titráciu protilátok. Erytrocyty senzibilizované protilátkami. sa nazývajú imunoglobulínové erytrocytové diagnosticum a používajú sa na detekciu antigénov.

Pasívna hemaglutinačná reakcia sa používa na diagnostiku chorôb spôsobených baktériami (týfus a paratýfus, úplavica, brucelóza, mor, cholera atď.), prvokmi (malária) a vírusmi (chrípka, adenovírusové infekcie, vírusová hepatitída B, osýpky, kliešť encefalitída, krymská hemoragická horúčka a pod.), ako aj na stanovenie niektorých hormónov, na zistenie precitlivenosti pacienta na lieky a hormóny ako penicilín a inzulín.

Reakcia pasívnej hemaglutinácie (RPHA). Pasívny hemaglutinačný test je citlivá metóda sérologickej diagnostiky a používa sa na včasnú a retrospektívnu diagnostiku, ako aj na stanovenie imunologického stavu očkovaných osôb. U pacientov s tularémiou sa protilátky zvyčajne detegujú na konci 1. alebo 2. týždňa ochorenia, po 1-1,5 mesiaci dosahujú titre TPHA svoje maximálne hodnoty (1:100 000-1:20 000, menej často vyššie), po ktorých pokles na úrovni 1:100-1:200 pretrvávajú dlhodobo.

U očkovaných sú protilátky tiež neustále zisťované, avšak v nižších titroch nepresahujúcich 1:2000-1:5000 1-1,5 mesiaca po očkovaní zostávajú niekoľko rokov na nízkej úrovni 1:20-1:80.

Tularemia erythrocyte diagnosticum (antigén) slúži ako antigén na nastavenie RPHA. Liečivo sú formalinizované baranie erytrocyty senzibilizované antigénom tularémie, dostupné v tekutej a suchej forme. Kvapalný prípravok - 10% suspenzia erytrocytov v roztoku formalínu s koncentráciou 10%. Suchý lyofilizovaný prípravok - vákuovo sušená 10% suspenzia erytrocytov bez konzervačnej látky. Pred použitím sa zriedi podľa pokynov na etikete. Na nastavenie reakcie v polystyrénových platniach sa používajú obe liečivá v koncentrácii 2,5 % a pri príprave reakcie v mikroobjemoch v koncentrácii 0,5 %.

Technika nastavenia RPGA. Testované séra sa zriedia fyziologickým roztokom v pomere 1:5 (1:10) a zahrievajú sa pri teplote 56 °C počas 30 minút. Potom, aby sa odstránili heterogénne protilátky proti baraním erytrocytom, sa séra ošetria 50 % suspenziou formalizovaných baraních erytrocytov. Na tento účel sa pridajú erytrocyty rýchlosťou 2 kvapky (0,05 ml) na 1 ml séra a dôkladne sa premiešajú pretrepaním. Sérum sa nechá až do úplnej sedimentácie erytrocytov alebo sa centrifuguje po jednej hodine pri izbovej teplote, po ktorej je pripravené na výskum.

Riediaca kvapalina sa naleje v objeme 0,5 ml do niekoľkých jamiek polystyrénovej platne. Pri predbežnej štúdii sér je vhodné ich otestovať nastavením reakcie v krátkom rade doštičky (6 otvorov). V prípade detekcie protilátok v krátkej sérii sér sa séra znovu vyšetria v dlhej sérii riedení (12 jamiek). Po rozliatí riediacej kvapaliny sa do prvej jamky každého radu (krátke alebo dlhé) pridá 0,5 ml testovacieho séra v riedení 1:5. Potom sa v rovnakých objemoch sérum titruje dvojnásobným riedením. Riedenie séra sa teda získa v krátkej sérii od 1:10 do 1:320 a v dlhej sérii - od 1:10 do 1:20480. Po titrácii séra sa do každej jamky pridá jedna kvapka (0,05 ml) pracovnej 2,5 % suspenzie senzibilizovaných erytrocytov. Obsah platní sa dôkladne pretrepe, kým sa nezíska homogénna suspenzia. Doštičky sa nechajú pri izbovej teplote na stacionárnom povrchu stola. Predbežná registrácia reakcie sa uskutoční po 2 až 3 hodinách, konečné stanovenie titra sa uskutoční po úplnej sedimentácii erytrocytov v jamkách. Pre reakciu sú poskytnuté nasledujúce kontroly: 1) testovacie sérum v riedení 1:10 v objeme 0,5 ml + 1 kvapka 2,5 % suspenzie nesenzibilizovaných erytrocytov; 2) riediaca kvapalina v objeme 0,5 ml + 1 kvapka 2,5 % suspenzie nesenzibilizovaných erytrocytov; 3) riediaca kvapalina v objeme 0,5 ml + 1 kvapka 2,5 % suspenzie senzibilizovaných erytrocytov. Všetky kontroly by mali mať jasne negatívnu reakciu.

Účtovanie a hodnotenie RPGA. Reakcia sa hodnotí podľa nasledujúcej schémy:

1) ostro pozitívna reakcia(++++) - erytrocyty padajú na dno jamky v jednotnej vrstve vo forme "dáždnika", ktorý má často vrúbkované okraje;

2) pozitívna reakcia (+++) - erytrocyty pokrývajú aspoň 2/3 dna otvoru;

3) slabo pozitívna reakcia (++) - aglutinát je malý a nachádza sa v samom strede otvoru;

4) pochybná reakcia (+) - okolo sedimentu erytrocytov v samom strede otvoru sú oddelené zrnká aglutinátu;

5) negatívny (-) - na dne otvoru sa erytrocyty usadzujú vo forme "gombíka" alebo malého krúžku s hladkými, ostro ohraničenými okrajmi.

Sérový titer sa berie do úvahy podľa posledného riedenia séra, ktoré poskytlo veľmi jasnú reakciu (najmenej tri plusy). Za diagnostický titer sa považuje riedenie 1:100 a vyššie, avšak rovnako ako v prípade RA je potrebné sledovať jeho zvýšenie.

TPHA pri tularémii je dosť špecifický a deteguje niektoré skrížené reakcie len so sérami na brucelózu. Diferenciálna diagnóza je možná podľa výšky titrov v TPHA, ktoré sú oveľa vyššie s homológnym antigénom.

Technika nastavenia RPHA v mikroobjemoch. RPHA sa môže uskutočňovať v mikroobjemoch s použitím mikrotitrača typu Takachi (alebo mikrotitračných platní s okrúhlym dnom s mikropipetami), ktoré umožňujú titráciu materiálu v objemoch 25 ul a 50 ul. Technika nastavenia reakcií, postupnosť všetkých operácií je rovnaká ako pri štúdiu v polystyrénových platniach. Treba však mať na pamäti, že citlivosť mikrometódy je zvyčajne o jedno riedenie (tj 2-krát) nižšia ako citlivosť makrometódy.

Na nastavenie reakcie v mikrotitra s použitím kvapkacej pipety sa do každej jamky zavedie riediaca kvapalina v objeme 50 μl. Potom sa pomocou titrátorov s 50 μl hlavicou odoberie testovacie sérum ponorením hlavice do nej. Uistite sa, že kvapalina naplnila hlavu titrátora. Titrátor so sérom sa prenesie do prvej jamky a pri držaní vo vertikálnej polohe vykoná niekoľko rotačných pohybov v oboch smeroch. Potom sa titrátor prenesie do ďalšej jamky a manipulácia sa zopakuje. Titrácia sa môže uskutočniť súčasne v niekoľkých radoch. Po titrácii celého radu sa titrátor rotačnými pohybmi premyje destilovanou vodou (s výmenou 2 porcií), tampónom sa z hlavy odstráni voda a vypáli sa na plameni horáka.

Po titrácii sa do jamiek pridá 25 μl erytrocytárneho diagnosticum. Koncentrácia diagnostika pre RPHA v mikroobjemoch by mala byť 0,5 % (t.j. 2,5 % suspenzia erytrocytov sa dodatočne zriedi 5-krát). Po pridaní erytrocytov by sa mali platne jemne pretrepávať, kým sa nezíska homogénna suspenzia. Výsledky je možné zaznamenať už po 1-1,5 hodine, čo je významná výhoda RPHA v mikrotitra. Okrem toho táto metóda vyžaduje malé množstvo všetkých zložiek reakcie a testovacích sér.

Reakcia sa počíta takto:

1) "+" - úplná hemaglutinácia, pri ktorej erytrocyty padajú na dno jamky v jednotnej vrstve vo forme "dáždnika", zaberajúcej najmenej 2/3 dna;

2) "+ -" - čiastočná hemaglutinácia, pri ktorej erytrocyty padajú na dno vo forme voľného krúžku malej veľkosti;

3) "-" - absencia hemaglutinácie, keď erytrocyty klesnú na dno vo forme malého gombíka alebo krúžku s hladkým okrajom.

Špecifickosť pozitívneho výsledku získaného pri TPHA môže byť testovaná pomocou trojzložkovej reakcie – reakcie inhibície pasívnej hemaglutinácie (RPHA).

Technika nastavenia RTPGA. Táto reakcia je nastavená tak, aby potvrdila špecifickosť pozitívneho výsledku RPHA v prípade pochybností alebo mimoriadneho epidemiologického záujmu. Reakčný mechanizmus spočíva v špecifickej inhibícii hemaglutinácie, keď sa do testovacieho séra pridá suspenzia usmrtených baktérií tularémie. V reakcii interagujú tri zložky: testované sérum, špecifický antigén tularémie a antigénne erytrocytové diagnosticum RTPGA sú zvyčajne umiestnené v rade 7-8 jamiek. Odporúča sa nainštalovať druhé RPGA paralelne s RTPGA. Do dvoch radov jamiek sa naleje 0,25 ml riediacej kvapaliny, potom sa do prvých jamiek oboch radov pridá testované sérum v objeme 0,25 ml a titruje sa. Získajú sa dva rovnaké rady riedení séra. Pridajte 0,25 ml riediacej kvapaliny do všetkých jamiek druhého radu a 0,25 ml suspenzie baktérií tularémie do jamiek prvého radu. Používa sa Tularemia diagnosticum (obsahuje 25 miliárd baktérií tularémie na 1 ml), predtým zriedená 50-krát. Takáto suspenzia obsahuje 500 miliónov baktérií v 1 ml alebo 125 miliónov v objeme 0,25 ml. Po pridaní antigénu sa doštička nechá 1 hodinu pri teplote miestnosti, potom sa do všetkých jamiek oboch radov pridá jedna kvapka (0,05 ml) erytrocytárneho diagnosticum, doštička sa pretrepe a nechá na rovnom povrchu stola. Účtovanie je hotové za 2-3 hodiny.

Účtovanie a hodnotenie RTPGA. Ak testovacie sérum obsahuje špecifické protilátky proti tularémii, sú neutralizované pridaným antigénom a hemaglutinácia sa nevyskytuje v prvom rade jamiek, alebo pri vysokom titri séra bude hemaglutinácia pozorovaná v menšom počte (2-4) jamkách ako v riadok s TPHA. V tomto prípade je potvrdená špecifickosť výsledkov. Ak je hemaglutinácia zaznamenaná v oboch radoch, t.j. výsledky RTHA a RPHA sa zhodujú, čo naznačuje neprítomnosť protilátok proti tularémii v testovanom sére. V tomto prípade sa primárny výsledok RPHA považuje za nešpecifický.

Technika nastavenia RTPGA v mikroobjemoch. RTHA, rovnako ako RPHA, sa môžu uskutočňovať v mikroobjemoch s použitím mikrotitra typu Takachi. Na tento účel sa do jamiek mikrodoštičiek v dvoch radoch po 7 až 8 jamkách pridá 0,25 μl riediacej kvapaliny. Potom sa pomocou titrátora ohodnotí 0,25 μl testovacieho séra a titruje sa v oboch radoch. Potom sa do každej jamky v prvom rade pridá 25 ul antigénu tularémie (ktorého koncentrácia je 500 miliónov baktérií tularémie v 1 ml) a v druhom rade 25 ul riediacej kvapaliny. Doštičky sa nechajú 1 hodinu pri teplote miestnosti, potom sa do všetkých jamiek oboch radov pridá 25 μl antigénneho erytrocytárneho diagnosticum (0,5 % koncentrácia). Účtovanie a vyhodnotenie výsledkov prebieha podobne ako reakcia v makroobjemoch.

Reakcia nepriamej hemaglutinácie (RIGA).

RIGA sa používa v dvoch verziách: so známymi antigénmi na detekciu protilátok so známymi protilátkami na detekciu hypertenzie. Táto reakcia je špecifická a používa sa na diagnostiku chorôb spôsobených baktériami a rickettsiae. Na vykonanie RIGA sa používajú erytrocytové diagnostické roztoky pripravené adsorpciou AG alebo AT na erytrocytoch v závislosti od účelu štúdie (obr. 10.3). V pozitívnych prípadoch je stupeň aglutinácie erytrocytov označený plusmi. Štyri plusy hodnotia reakciu, ktorá má formu tenkého filmu lepiacich erytrocytov (dáždnik) pokrývajúceho dno skúmavky; prítomnosť filmu s vrúbkovanými krajkami je označená dvoma plusmi. Titer sa berie ako limitné riedenie testovaného materiálu, ktoré spôsobilo aglutináciu erytrocytov dvoma plusmi.

Ryža. 10.3.

1 - erytrocyty, 2 - erytrocyt AG, 3 - konjugovaný AG, 4-AT

RGA a hemaglutinačná inhibičná reakcia (RTGA).

Ako už bolo uvedené, RGA je založená na schopnosti erytrocytov držať sa spolu, keď sú na ne adsorbované určité antigény. Ako testovací materiál na hemaglutináciu sa používa alantoický, plodová voda, suspenzia chorion-alantoidných membrán kuracích embryí, suspenzie a extrakty z kultúr alebo orgánov zvierat infikovaných vírusmi, natívny infekčný materiál. RGA nie je sérologická reakcia, pretože sa vyskytuje bez účasti imunitného séra a používa sa na výber pracovného riedenia AG na nastavenie RTGA alebo prítomnosti AG (vírusu) v testovanom materiáli (napríklad pri chrípke). Reakcia využíva erytrocyty zvierat, vtákov, ľudí s krvnou skupinou I (0). Na nastavenie približného RGA sa na podložné sklíčko nanesie kvapka 5 % suspenzie erytrocytov a kvapka testovaného materiálu, pričom sa dôkladne premieša. O pozitívny výsledok po 1-2 minútach makroskopicky pozorujte výskyt flokulentnej aglutinácie erytrocytov. Na nastavenie RHA v predĺženom rade v jamkách polystyrénových platní sa pripravia dvojnásobne sa zvyšujúce riedenia testovaného materiálu vo fyziologickom roztoku v objeme 0,5 ml. Do všetkých skúmaviek sa pridá 0,5 ml 0,25-1% suspenzie erytrocytov. Výsledky sa berú do úvahy po úplnej sedimentácii erytrocytov v kontrole (erytrocyty + fyziologický roztok). Reakcia sa berie do úvahy podľa charakteru sedimentu erytrocytov. V pozitívnych prípadoch je stupeň aglutinácie označený plusmi. Štyri plusy hodnotia reakciu, ktorá má formu tenkého filmu zlepených erytrocytov pokrývajúcich dno skúmavky (dáždnik), reakcia s medzerami vo filme je označená tromi plusmi, prítomnosť filmu s vrúbkovanými krajkovými okrajmi zlepených erytrocytov je označený dvoma plusmi, vločkovitý sediment erytrocytov obklopený zónou zlepených hrčiek erytrocytov zodpovedá jednému plus. Ostro ohraničený sediment erytrocytov, na nerozoznanie od kontroly, vykazuje absenciu aglutinácie. Titer sa berie ako limitné riedenie testovaného materiálu, ktoré spôsobilo aglutináciu erytrocytov dvoma plusmi. Ak je výsledok RHA pozitívny, štúdia pokračuje stanovením typu izolovaného vírusu pomocou HA RT s typovo špecifickými sérami. RTGA je založená na schopnosti antiséra potlačiť hemaglutináciu vírusu, keďže vírus neutralizovaný špecifickými protilátkami stráca schopnosť aglutinovať červené krvinky. Na približnú typizáciu vírusov sa používa metóda kvapky na sklo. Na konečné určenie typovej príslušnosti izolovaného vírusu a titráciu protilátok v sére sa expandovaný RTHA umiestni do skúmaviek alebo do jamiek. Na tento účel sa pripravia dvojnásobné riedenia séra vo fyziologickom roztoku a nalejú sa do 0,25 ml. K riedeniu séra sa pridá jedna kvapka materiálu obsahujúceho vírus a jedna kvapka 1 % suspenzie erytrocytov. Pri použití RTGA na určenie typu vírusu sa používajú typovo špecifické séra, ktoré sa pridávajú do rovnakého objemu pracovného riedenia AG. Typová príslušnosť izolovaného vírusu je stanovená špecifickým imunitným sérom, ktoré vykazovalo najvyšší titer protilátok proti tomuto vírusu. RGA a RTGA sa široko používajú na diagnostiku vírusové infekcie(kliešťová encefalitída, chrípka a pod.) s cieľom zistiť špecifické protilátky a identifikovať mnohé vírusy podľa ich antigénov.

11621 0

Sérologické reakcie sa označujú v súlade s javmi sprevádzajúcimi tvorbu komplexu antigén-protilátka počas interakcie zložiek s rôznymi vlastnosťami. Existujú reakcie aglutinácie, precipitácie a lýzy.

Aglutinačná reakcia (RA)

Aglutinačná reakcia (RA) je založená na použití korpuskulárneho antigénu (suspenzia baktérií, senzibilizovaných erytrocytov, latexových častíc a pod.) interagujúceho so špecifickými protilátkami, v dôsledku čoho sa vyzráža výsledný komplex antigén-protilátka. Táto reakcia je široko používaná v laboratórnej praxi na sérologickú diagnostiku bakteriálnych infekcií a na identifikáciu izolovaných mikroorganizmov.

RA sa používa na diagnostiku mnohých infekčných ochorení: brucelóza (Wright, Heddlesonova reakcia), tularémia, leptospiróza (RAL - leptospira aglutination and lysis reaction), listerióza, týfus (RAP - rickettsia aglutination response), shigelóza, yersinióza, pseudotuberkulóza atď.

Reakcia nepriamej alebo pasívnej aglutinácie (RIGA alebo RPGA).

Na nastavenie tejto reakcie sa používajú erytrocyty zvierat (ovce, opice, morčatá, niektoré vtáky) senzibilizované protilátkami alebo antigénom, čo sa dosiahne inkubáciou suspenzie erytrocytov a roztoku antigénu alebo imunitného séra.

Diagnostika získaná na základe erytrocytov senzibilizovaných antigénmi sa nazývajú antigénna diagnostika erytrocytov. Sú určené na detekciu protilátok v sériových riedeniach krvných sér, ako sú erytrocytové shigellosis diagnosticums, erytrocytové salmonely O-diagnosticum.

V súlade s tým sa nazývajú diagnostické metódy založené na erytrocytoch senzibilizovaných špecifickými imunoglobulínmi protilátka(imunoglobulín) diagnostika a slúžia na detekciu antigénov v rôznom materiáli, napr. erytrocytový imunoglobulínový difterický diagnosticum pre RIGA, používaný na detekciu difterického exotoxínu korynebaktérií v tekutom živnom médiu, keď sa doň naočkuje materiál z nosa a orofaryngu.

Hemaglutinačná reakcia sa používa na diagnostiku bakteriálnych (brušný týfus, paratýfus, úplavica, brucelóza, mor, cholera a pod.) aj vírusových (chrípka, adenovírusové infekcie, osýpky atď.). RIGA je lepšia v citlivosti a špecifickosti voči RA.

Hemaglutinačná inhibičná reakcia (HITA)

Hemaglutinačný inhibičný test (HITA) sa používa na titráciu antivírusových protilátok v krvnom sére, ako aj na stanovenie typu afiliácie izolovaných vírusových kultúr. RTHA sa môže použiť na diagnostiku tých vírusových infekcií, ktorých patogény majú hemaglutinačné vlastnosti.

Princíp metódy spočíva v tom, že sérum obsahujúce protilátky proti špecifickému typu vírusu potláča jeho hemaglutinačnú aktivitu a erytrocyty zostávajú neaglutinované.

Reakcia inhibície (oneskorenie) pasívnej hemaglutinácie (RTPGA).

V RTGA sa podieľajú tri zložky: imunitné sérum, antigén (testovaný materiál) a senzibilizované erytrocyty.

Ak testovaný materiál obsahuje antigén, ktorý špecificky reaguje s protilátkami imunitného štandardného séra, potom ich naviaže a následným pridaním erytrocytov senzibilizovaných antigénom homológnym so sérom k hemaglutinácii nedochádza.

RTPHA sa používa na detekciu mikrobiálnych antigénov, na ich kvantifikáciu a tiež na kontrolu špecifickosti TPHA.

Latexová aglutinačná reakcia (RLA)

Latexové častice sa používajú ako nosiče protilátok (imunoglobulínov). RLA je expresná metóda na diagnostiku infekčných ochorení, berúc do úvahy čas, ktorý to trvá (do 10 minút) a schopnosť detegovať antigén v malom objeme testovaného materiálu.

RLA sa používa na indikáciu antigénov Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae typu b, Neisseria meningitidis v mozgovomiechovom moku, na detekciu streptokokov skupiny A vo výteroch z hrdla, na diagnostiku salmonelózy, yersiniózy a iných ochorení. Citlivosť metódy je 1-10 ng/ml, alebo 10³-10⁶ bakteriálnych buniek v 1 µl.

Koaglutinačná reakcia (RKoA)

Koaglutinačná reakcia (RKoA) je založená na schopnosti proteínu A stafylokokov pripájať špecifické imunoglobulíny. RKA - metóda expresnej diagnostiky - sa používa na identifikáciu rozpustných termostabilných antigénov v ľudských tajomstvách a v zložení cirkulujúcich imunitných komplexov (CIC). Detekcia špecifických antigénov v zložení CEC vyžaduje ich predbežné vyzrážanie z krvného séra.

zrážacia reakcia

Pri precipitačnej reakcii (RP) v dôsledku interakcie protilátok s vysoko disperznými rozpustnými antigénmi (proteíny, polysacharidy) vznikajú za účasti komplementu - precipitáty komplexy. Je to citlivý test používaný na detekciu a charakterizáciu rôznych antigénov a protilátok. Najjednoduchším príkladom kvalitného RP je vytvorenie nepriehľadného precipitačného pásu v skúmavke na hranici vrstvy antigénu na imunitnom sére – prstencová precipitačná reakcia. Rôzne typy RP sú široko používané v polotekutom agare alebo agarózových géloch (dvojitá imunodifúzna metóda, radiálna imunodifúzna metóda, imunoelektroforéza).

Reakcia fixácie komplementu (CFR)

Reakcia fixácie komplementu (CFR) je založená na fenoméne hemolýzy zahŕňajúcej komplement, t.j. dokáže detegovať len protilátky fixujúce komplement.

RSC sa široko používa na diagnostiku mnohých bakteriálnych a vírusových infekcií, rickettsiózy, chlamýdií, infekčná mononukleóza, protozoálne infekcie, helmintiázy. RSC je komplexná sérologická reakcia, na ktorej sa podieľajú dva systémy: testovací systém (krvné sérum), reprezentovaný systémom antigén-protilátka a komplement, a hemolytický (ovčie erytrocyty + hemolytické sérum). Hemolytické sérum je teplom inaktivované krvné sérum králika imunizovaného baraními erytrocytmi. Obsahuje protilátky proti ovčím erytrocytom.

Pozitívny výsledok RSK - absencia hemolýzy - sa pozoruje, ak testovacie sérum obsahuje protilátky homológne s antigénom. V tomto prípade výsledný komplex antigén-protilátka viaže komplement a pri absencii voľného komplementu nie je pridanie hemolytického systému sprevádzané hemolýzou. Pri nedostatku protilátok zodpovedajúcich antigénu v sére nedochádza k tvorbe komplexu antigén-protilátka, komplement zostáva voľný a sérum spôsobuje hemolýzu erytrocytov, t.j. prítomnosť hemolýzy je negatívnym výsledkom reakcie.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.

Reakcia inhibície hemaglutinácie

Hemaglutinačná reakcia

Aglutinačná reakcia

Aglutinačná reakcia (RA) je aglutinácia a precipitácia mikróbov alebo iných buniek pôsobením protilátok v prítomnosti elektrolytu (izotonický roztok chloridu sodného). Vzniknutá zrazenina sa nazýva aglutinovať.

Pre reakciu potrebujete:

1. Protilátky (aglutiníny) – sú v sére pacienta alebo v imunitnom sére.

2. Antigén – suspenzia živých alebo usmrtených mikroorganizmov, erytrocytov alebo iných buniek.

3. Izotonický roztok.

Aglutinačná reakcia na sérodiagnostiku je široko používaná pre brušný týfus, paratýfus (Vidalova reakcia), brucelózu (Wrightova reakcia) atď. sérum pacienta a antigén je známy mikrób.

Keď sú identifikované mikróby alebo iné bunky, ich suspenzia slúži ako antigén a známe imunitné sérum slúži ako protilátka. Táto reakcia je široko používaná pri diagnostike črevných infekcií, čierneho kašľa atď.

V laboratórnej praxi sa využívajú dve hemaglutinačné reakcie (RHA), ktoré sa líšia mechanizmom účinku.

Prvé RGA odkazuje na sérológiu. Pri tejto reakcii dochádza k aglutinácii erytrocytov pri interakcii so zodpovedajúcimi protilátkami (hemaglutiníny). Reakcia sa široko používa na stanovenie krvných skupín.

Druhé RGA nie je sérologický. V ňom je lepenie červených krviniek spôsobené nie protilátkami, ale špeciálnymi látkami tvorenými vírusmi. Napríklad vírus chrípky aglutinuje erytrocyty kurčiat a morčiat, vírus detskej obrny aglutinuje erytrocyty oviec. Táto reakcia umožňuje posúdiť prítomnosť konkrétneho vírusu v testovanom materiáli.

Ide o sérologickú reakciu, pri ktorej špecifické antivírusové protilátky interagujúce s vírusom (antigénom) ho neutralizujú a zbavujú ho schopnosti aglutinovať červené krvinky, t.j. inhibovať hemaglutinačnú reakciu. Vysoká špecifickosť hemaglutinačnej inhibičnej reakcie (HITA) umožňuje jej použitie na určenie typu a dokonca aj typu vírusov detekovaných počas HA.

Reakcia nepriamej (pasívnej) hemaglutinácie (RIHA) je založená na skutočnosti, že erytrocyty, ak je na ich povrchu adsorbovaný rozpustný antigén, získavajú schopnosť aglutinácie pri interakcii s protilátkami proti adsorbovanému antigénu. Schéma RNGA je znázornená na obr. RNHA sa široko používa pri diagnostike mnohých infekcií.

Ryža. Schéma reakcie pasívnej hemaglutinácie (RPHA). A - získanie diagnostiky erytrocytov; B - RNGA: 1-erytrocyt: 2 - študovaný antigén; 3 - diagnostika erytrocytov; 4 - protilátka na študovaný antigén: 5 - aglutinát.

Pomocou RNHA možno určiť neznámy antigén, ak sú na erytrocytoch adsorbované známe protilátky.

Títo reakcie volal nepriamy (pasívny), keďže používajú Ag (alebo AT) umelo sorbované na povrchu rôznych korpuskulárnych častíc.

Reakcia nepriamej alebo pasívnej hemaglutinácie (RNGA, RPGA) je jednou z najcitlivejších sérologických reakcií. Je založená na schopnosti AT interagovať s Ag fixovaným na rôznych erytrocytoch, ktoré zároveň aglutinujú. Pre väčšiu stabilitu diagnostiky sú erytrocyty formalizované.

Reverzná RNGA používa sa na detekciu antigénu v krvnom sére; na to nie sú na erytrocyty fixované Ag, ale AT. Reakcie tohto typu sú široko používané na diagnostiku infekčných chorôb, stanovenie tehotenstva, detekciu precitlivenosti na lieky atď.

Reakcia pasívnej inhibície hemaglutinácie (RTPGA) - ďalší vývoj RNGA; v určitom zmysle riadi jeho špecifickosť. Na rozdiel od RNGA obsahuje tri zložky; Ag, AT a Ag (AT) adsorbované na erytrocytoch. Najprv Ag reaguje s AT (štandardné antisérum), potom sa do zmesi pridajú erytrocyty senzibilizované rovnakým Ag (alebo AT). Ak počas interakcie Ag s AT nezostane v systéme voľný AT (alebo Ag), potom nie je pozorovaná aglutinácia erytrocytového diagnostica.