Čo sa určuje metódou if. Čo znamená pozitívny výsledok ELISA (enzymatický imunotest)?

VŠEOBECNÉ FARMAKOPICKÉ POVOLENIE

Prvýkrát predstavený

Táto monografia všeobecného liekopisu zahŕňa metódu enzýmovej imunoanalýzy (ELISA). Metóda ELISA je vysoko citlivá a vysoko špecifická imunodiagnostická metóda, pomocou ktorej sa uskutočňuje kvalitatívne a kvantitatívne stanovenie rôznych látok, ktoré majú vlastnosti antigénu, hapténu (neúplný antigén) alebo protilátky. Metóda ELISA je široko používaná na diagnostiku infekčných a neinfekčných ochorení u ľudí a zvierat a môže sa použiť aj na potvrdenie kvality imunobiologických lieky(ILP).

Princíp metódy spočíva v reakcii špecifickej interakcie antigénu s protilátkou za vzniku imunitného komplexu a následnej detekcii vzniknutého komplexu pomocou spektrofotometrie, chemiluminiscencie a iných adekvátnych metód. Detekcia môže byť priama (keď samotná testovaná látka má enzymatickú aktivitu alebo je označená enzýmovou značkou), ako aj nepriama alebo nepriama (keď sa testovaná látka naviazaná na protilátky imobilizované na pevnej fáze inkubuje s protilátkami označenými enzýmom ). Kvalitatívna analýza vám umožňuje získať informácie o obsahu antigénu alebo protilátky v testovacom materiáli podľa princípu „áno/nie“. Pri vykonávaní kvantitatívnej analýzy sa koncentrácia antigénu alebo protilátky v testovanom materiáli stanoví pomocou kalibračnej krivky.

VŠEOBECNÉ USTANOVENIA

Metóda ELISA zahŕňa 3 hlavné etapy: 1) vytvorenie imunitného komplexu "antigén (testovaná látka) - protilátka preň špecifická" alebo naopak; 2) vytvorenie konjugovanej väzby s imunitným komplexom vytvoreným v predchádzajúcom štádiu alebo s voľnými väzbovými miestami (determinanty); 3) transformácia substrátu pôsobením enzýmovej značky na zaznamenaný signál ako výsledok biochemickej reakcie.

Všetky metódy na vykonávanie enzýmovej imunoanalýzy sú klasifikované ako homogénne alebo heterogénne.

Techniky, pri ktorých všetky 3 stupne ELISA prebiehajú v roztoku a medzi hlavnými stupňami nie sú žiadne dodatočné kroky na oddelenie vytvorených imunokomplexov od nezreagovaných zložiek, patria do skupiny homogénnych metód ELISA. Základom homogénnej ELISA, ktorá sa zvyčajne používa na stanovenie látok s nízkou molekulovou hmotnosťou, je proces inhibície aktivity enzýmu, keď je kombinovaný s antigénom alebo protilátkou. V dôsledku reakcie antigén-protilátka sa aktivita enzýmu obnoví. Keď sa vytvorí imunitný komplex antigén-protilátka obsahujúci enzýmovú značku, aktivita enzýmu je inhibovaná o 95 % vzhľadom na substrát s vysokou molekulovou hmotnosťou, čo je spôsobené stérickým vylúčením substrátu z aktívneho centra enzýmu. So zvyšujúcou sa koncentráciou antigénu sa viaže stále viac protilátok a zadržiava sa stále viac voľných konjugátov antigén-enzým, ktoré môžu hydrolyzovať substrát s vysokou molekulovou hmotnosťou. Homogénna metóda ELISA je veľmi rýchla. Analýza jednej definície trvá 1 minútu. Citlivosť metódy je pomerne vysoká. Pomocou neho môžete určiť látku na úrovni pikomolov.

Pre heterogénne metódy je typické vykonávanie analýzy v dvojfázovom systéme za účasti pevnej fázy - nosiča a štádia separácie imunitných komplexov od nezreagovaných zložiek (premývanie), ktoré sú v rôznych fázach (výsledný imunitný komplexy sú v tuhej fáze a nezreagované komplexy sú v roztoku) je povinný. Heterogénne metódy, pri ktorých tvorba imunitných komplexov v prvom štádiu prebieha na pevnej fáze, sa nazývajú metódy na pevnej fáze.

Metódy sa klasifikujú ako homogénne-heterogénne, ak sa prvý stupeň - tvorba špecifických komplexov - vyskytuje v roztoku a potom sa na oddelenie zložiek použije tuhá fáza s imobilizovaným činidlom.

Heterogénna metóda ELISA pozostáva z 3 hlavných krokov:

• imobilizácia antigénu alebo protilátky na pevnej fáze, výsledný komplex sa nazýva imunosorbent;
• odstránenie nenaviazaného činidla a blokovanie väzbových miest na pevnom nosiči pomocou blokujúcich proteínov, ako je napríklad albumín, kazeín; inkubácia analyzovaného prípravku s imunosorbentom, aby došlo k ich naviazaniu;

3) detekcia v dôsledku enzymatickej aktivity samotnej testovanej látky alebo v dôsledku enzymatickej značky spojenej s analyzovaným prípravkom (priamy variant). V niektorých prípadoch sa uskutočňuje dodatočná inkubácia komplexu "imunosorbent-testovaná látka" so sekundárnymi protilátkami konjugovanými s enzymatickou značkou (nepriamy variant).

Kvantitatívne stanovenie analytu sa uskutočňuje pridaním substrátu vhodného pre použitý detektor a porovnaním signálu analytu so štandardnou vzorkou.

Metóda heterogénnej ELISA sa delí na nekompetitívnu ELISA a kompetitívnu ELISA. Schémy testov sa môžu počas vývoja lieku upravovať v súlade s potrebnými požiadavkami. Zmeny by mali byť uvedené v monografii alebo normatívnej dokumentácii. Výber metódy ELISA závisí od povahy testovanej látky a jej množstva, keďže odlišné typy Testy ELISA majú rôznu citlivosť. Na posúdenie kvality látok s obsahom protilátok je možné použiť špecifické antiidiotypické protilátky.

Nekompetitívna metóda ELISA

Nekompetitívna metóda ELISA sa delí na niekoľko typov podľa typu detekcie (priama kompetitívna, nepriama (nepriama) kompetitívna) a typu látky imobilizovanej na pevnej fáze (antigén alebo protilátka).

Priama ELISA

Dá sa to urobiť 2 spôsobmi. V prvom prípade je testovaná látka (antigén) priamo imobilizovaná na pevnej fáze; potom je detektorom značená protilátka naviazaná na antigén. Pri vykonávaní testu iným spôsobom sa používajú protilátky imobilizované na pevnej fáze. V tomto prípade je detektorom testovaná látka označená enzýmom.

Nepriamy (nepriamy) variant ELISA

Pri vykonávaní nepriameho variantu ELISA je antigén imobilizovaný na pevnej fáze. Po zablokovaní sa k antigénu pridá roztok protilátok preň špecifických. Po inkubácii sa vzniknutý komplex antigén-protilátka odmyje od nenaviazaných protilátok a pridá sa enzýmom značený anti-imunoglobulín (anti-Ig), ktorý funguje ako detektor. Anti-Ig detektory sú komerčne dostupné pre špecifické Ig triedy a podtriedy, vďaka čomu je tento formát testu vhodný na izotypizáciu protilátok. Okrem toho použitie značeného anti-Ig zosilňuje signál v porovnaní s priamou ELISA, čím sa zvyšuje citlivosť testu.

Sendvičová metóda ako variant ELISA

Najbežnejšou nesúťažnou metódou je „sendvičová“ metóda. Keď sa uskutočňuje na pevnej fáze, primárne protilátky sú imobilizované s ich následným blokovaním. Potom sa k nim pridá testovaná látka obsahujúca antigén a inkubuje sa. Po inkubácii sa komplex antigén-protilátka vymyje z nenaviazaného antigénu, pridajú sa sekundárne protilátky značené enzýmom a vykoná sa detekcia.

Kompetitívna metóda ELISA

Kompetitívna metóda ELISA sa delí na niekoľko typov: podľa typu detekcie (priama kompetitívna, nepriama (nepriama) kompetitívna) a podľa typu látky imobilizovanej na pevnej fáze (antigén alebo protilátka).

Priama konkurenčná ELISA

Na detekciu alebo kvantifikáciu rozpustných antigénov sa používa priama kompetitívna ELISA s antigénom imobilizovaným na pevnej fáze. Na tento účel použite antigén-špecifické protilátky konjugované s vhodným detektorom (napríklad chrenová peroxidáza, alkalický fosfát ruténium alebo fluoresceín). Štandardný antigén je imobilizovaný na pevnej fáze, po čom nasleduje blokovanie. Protilátka značená enzýmom sa inkubuje s testovanou látkou (rozpustný antigén). Potom sa táto zmes pridá k imobilizovanému antigénu, inkubuje sa a potom sa premyje z nenaviazaného komplexu antigén-protilátka. Ďalším krokom je pridanie vhodného substrátu pre značený enzým. Inhibícia reakcie v dôsledku prítomnosti 2 antigénov v systéme v porovnaní s kontrolnou vzorkou bez kompetitívneho rozpustného antigénu je nepriamo úmerná hodnote množstva testovanej látky.

Uskutočnenie priameho kompetitívneho testu ELISA s protilátkou imobilizovanou na pevnej fáze je podobné priamemu kompetitívnemu testu ELISA s antigénom imobilizovaným na pevnej fáze, ale používa sa na detekciu alebo kvantifikáciu protilátok.

Nepriama (nepriama) kompetitívna ELISA

Táto metóda ELISA je podobná priamemu kompetitívnemu variantu, avšak namiesto značenej protilátky alebo antigénu sa na detekciu používa značené anti-Ig činidlo alebo značené sekundárne protilátky, resp.

Všeobecné podmienky pre metóduELISA

Ako pevná fáza pre enzýmovú imunoanalýzu sa používajú rôzne materiály: silikón, nitrocelulóza, polyamidy, polystyrén, polyvinylchlorid, polypropylén, akryl a iné. Pevnou fázou môžu byť steny skúmavky, 96-jamkové a iné doštičky, guľôčky, guľôčky, ale aj nitrocelulóza a iné membrány, ktoré aktívne absorbujú proteíny. Princíp imobilizácie (hydrofóbna, hydrofilná, kovalentná interakcia) závisí od výberu pevnej fázy. Najčastejšie používanou tuhou fázou sú 96-jamkové plastové mikrotitračné doštičky. Počet jamiek na platni sa môže líšiť. Platňa môže byť priehľadná (kolorimetrická detekcia) a nepriehľadná (chemiluminiscenčná detekcia, fluorimetria).

Imobilizácia sa musí vykonať bez vzduchových bublín v jamke, pretože ich prítomnosť mení odčítanie optickej hustoty. Je možné použiť biotinylované imobilizované činidlá. V tomto prípade sa v reakcii používa streptavidín a biotinylovaná enzýmová značka. Táto metóda sa používa na zosilnenie signálu. Čas a teplota imobilizácie v závislosti od kinetickej povahy, stability a koncentrácie činidla by mali byť uvedené v monografii a normatívnej dokumentácii.

Všetky stupne enzýmového imunotestu, premývacie a blokovacie roztoky, časové intervaly a teplotné podmienky pre každý stupeň, počet otáčok za minútu pri inkubácii na trepačke, detekčné podmienky by mali byť uvedené aj v monografii a regulačnej dokumentácii.

Príklady metód pre niektoré typy ELISA

Nepriama nekompetitívna metóda ELISA

1. Sorpcia antigénu. Do každej jamky 96-jamkovej platne sa pridá 0,1-0,5 ug antigénu a 100 ul 0,05 M uhličitanovo-hydrogenuhličitanového tlmivého roztoku (pH 9,6), pokiaľ nie je uvedené inak v monografii alebo normatívnej dokumentácii, a potom sa uskutoční sorpcia pri teplote 4 ° C po dobu 16 hodín. Môžu sa použiť aj iné tlmivé roztoky s vysokými hodnotami pH. Inkubácia sa uskutočňuje trepaním na horizontálnej doskovej trepačke.

Premytie (dvojité) nenaviazaných molekúl antigénu sa uskutočňuje fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom (pH 9,0) obsahujúcim 0,1 % tween-20 (300 ul na jamku), pokiaľ nie je v liekopisnej monografii alebo v regulačnej dokumentácii uvedené inak.

1. Blokovanie. Na blokovanie miest nešpecifickej väzby antigénov alebo protilátok sa jamky doštičky naplnia fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom (pH 9,0) alebo iným pufrovacím roztokom špecifikovaným v liekopisnej monografii alebo v regulačnej dokumentácii s obsahom 1% roztoku hovädzieho sérového albumínu alebo iných proteínov (kazeín, želatína, sušené mlieko atď.) a inkubujú sa 10-15 minút pri izbovej teplote (pokiaľ nie je v monografii alebo normatívnej dokumentácii uvedené inak).

III. Titrácia špecifických protilátok. Ak sa vyžaduje kvantifikácia, testovaná látka (antigén alebo protilátka) sa titruje v sériových riedeniach paralelne so štandardnou vzorkou (RS).

Titráciu je možné vykonávať v horizontálnych aj vertikálnych radoch platne. Je potrebné poznamenať, že titrácia protilátok sa vykonáva, ak je potrebné vybrať optimálnu koncentráciu protilátok alebo určiť ich titer. V prípade, že sa stanoví optimálna koncentrácia a/alebo titer protilátok, potom sa použije riedenie odporúčané pre tieto protilátky (sérum).

Pri titrácii sa do prvej jamky v rade zavedie hotové riedenie protilátok – v priemere 1–10 μg na jamku, potom sa v jamkách vykoná sériové riedenie protilátok. Inkubácia so špecifickými protilátkami sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti s trepaním na horizontálnej trepačke platní.

Premytie sa uskutoční aspoň 3-4 krát s použitím fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku pH 9,0 obsahujúceho 0,1 % Tween-20.

1. Pridanie protidruhových (antiglobulínových) protilátok konjugovaných s enzýmovou značkou. Ako detektorové (sekundárne) protilátky sa používajú protidruhové polyklonálne protilátky konjugované s enzymatickou značkou. Najčastejšie sa používajú kozie alebo králičie protilátky, špecifické pre celú molekulu alebo pre Fc fragmenty špecifických protilátok. Koncentráciu detektorových protilátok výrobca zvyčajne udáva ako riedenie zásobného roztoku (napríklad 1:1000).

Inkubácia so sekundárne značenými protilátkami sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti s trepaním na horizontálnej trepačke platní.

Premytie sa vykoná aspoň 3-4 krát s použitím fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku (pH 9,0) obsahujúceho 0,1 % Tween-20.

Inkubácia sa uskutočňuje počas 10 minút pri teplote miestnosti a pretrepáva sa na horizontálnej trepačke platní.

1. Do jamiek sa pridá 100 ul roztoku substrátu a inkubuje sa 10 minút pri teplote miestnosti za stáleho miešania. Na zastavenie enzymatickej reakcie sa používa „zastavovacie činidlo“, ktoré sa pridáva do všetkých testovacích a kontrolných vzoriek v rovnakých množstvách. Najčastejšie sa ako "zastavovacie činidlo" používa kyselina sírová.

Priamy nesúťažný Metóda ELISA

Metóda priamej ELISA má len malé rozdiely od metódy nepriamej nekompetitívnej ELISA. Fázy I a II sú teda rovnaké v oboch typoch analýzy. Rozdiel spočíva v tom, že v priamej verzii ELISA v štádiu III sa používajú protilátky špecifické pre testovaný antigén, konjugované s enzýmovou značkou a priamo interagujú s testovanou látkou. Ak je to potrebné, je tiež možné titrovať konjugáty rovnakým spôsobom, ako bolo opísané vyššie pre nekonjugované protilátky. Štádium IV v rámci priamej nesúťažnej ELISA sa nevykonáva.

"Sendvičová" metóda ELISA

Tento variant ELISA používa pár protilátok (primárnych a sekundárnych) špecifických pre priestorovo vzdialené epitopy študovaného antigénu.

1. Sorpcia protilátok na pevnej fáze. Metóda sorpcie antigénu je podobná metóde sorpcie protilátok v časti „Nepriama nekompetitívna ELISA“.
2. Blokovanie. Technika blokovania nešpecifických väzbových miest na substráte (tuhá fáza) je podobná technike blokovania opísanej v časti „Nepriama nekompetitívna ELISA“.

III. Inkubácia s antigénom. Do jamiek tablety s vopred adsorbovanými protilátkami sa pridá 50 ul testovanej látky a štandardné riedenia antigénu, pokiaľ nie je v monografii alebo normatívnej dokumentácii uvedené inak. Riedenie antigénu by sa malo pripraviť s fosfátovým pufrom (pH 9,0) obsahujúcim 0,1 % Tween-20, pretože Tween-20 znižuje nešpecifickú väzbu proteínových molekúl medzi sebou a na povrch platne. Testovaná látka aj štandardné riedenia antigénu sa pridajú v pároch do susedných jamiek v horizontálnom rade (alebo 3 replikáty), pričom sa použijú 2 (3) jamky pre každé riedenie proteínu.

Inkubácia sa uskutočňuje pri teplote miestnosti počas 30 minút za stáleho miešania. Premytie sa uskutoční aspoň 3-4 krát fosfátovým tlmivým roztokom (pH 9,0) obsahujúcim 0,1 % Tween-20 alebo iným tlmivým roztokom špecifikovaným v monografii alebo regulačnej dokumentácii.

1. Inkubácia s enzýmom značenými protilátkami. Do jamiek tablety sa pridá 100 μl roztoku špecifických protilátok konjugovaných s enzýmovou značkou. Optimálna koncentrácia konjugovaných protilátok je spravidla uvedená v monografii alebo regulačnej dokumentácii (zvyčajne sa používa koncentrácia 2–4 ​​µg/ml).

Inkubácia s enzýmom značenými protilátkami sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti s trepaním na horizontálnej trepačke platní.

Premývanie sa vykonáva aspoň 3-4 krát s použitím fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku (pH 9,0) obsahujúceho 0,1 % Tween-20 alebo iného pufrovacieho roztoku špecifikovaného v monografii alebo regulačnej dokumentácii.

1. Uskutočnenie enzymatickej reakcie sprevádzané objavením sa farebného produktu. Postup vykonania enzymatickej reakcie je podobný postupu opísanému v časti: „Nepriama nekompetitívna metóda ELISA“.

detekcia

Ako je uvedené vyššie, na detekciu sa používajú protilátky označené enzýmovou značkou alebo iným činidlom. Enzýmovou značkou môže byť napríklad chrenová peroxidáza, alkalická fosfatáza alebo galaktozidáza. Ako detektor sa môžu použiť protilátky alebo antigény s inými značkami. Výber detekčného činidla závisí od typu značky konjugovanej s protilátkou alebo antigénom a od metódy detekcie.

Ako detekčné metódy je možné použiť spektrofotometriu, chemiluminiscenciu, fluorimetriu a iné metódy na základe výberu značky.

Výsledky kvantitatívnej metódy ELISA

Výsledky kvantitatívnej metódy ELISA sa vypočítajú z lineárnej kalibračnej krivky s inverznou regresiou alebo pomocou komplexnej metódy s použitím nelineárnej kalibračnej krivky s inverznou regresiou. Metóda interpretácie výsledkov závisí od metódy použitej na nastavenie ELISA. Napríklad z výsledkov testu pomocou kalibračnej krivky môžete vyhodnotiť koncentráciu neznámej vzorky, vyhodnotiť polovičnú maximálnu koncentráciu inhibície alebo efektívnu koncentráciu. To vám umožňuje určiť množstvo testovanej látky alebo jej aktivitu v porovnaní s referenčným/kalibračným štandardom (RS). Zvyčajne forma kalibračnej krivky pri vykonávaní kvantitatívnej metódy ELISA, ktorá charakterizuje koncentráciu analyzovaného liečiva, závisí od vypočítanej priemernej hodnoty nelineárne. V tejto súvislosti sa odporúča použiť rôzne matematické modely na analýzu výslednej krivky. V iných prípadoch sa metóda ELISA používa ako kvalitatívna metóda na posúdenie prítomnosti konkrétnej testovanej látky vo vzorke v rámci citlivosti metódy.

Poznámka.

Príprava uhličitanovo-bikarbonátového tlmivého roztoku (pH 9,6). Do odmerného valca s objemom 1000 ml sa pridá 1,59 g uhličitanu sodného (bezvodého) alebo 4,29 g 10-vodného uhličitanu sodného a 2,93 g hydrogénuhličitanu sodného, ​​rozpustí sa v 800 ml čistenej vody, pH sa upraví na 9,6. , premiešajte, potom doplňte objem roztoku po značku čistenou vodou a znova premiešajte.

(ELISA) je metóda vyšetrenia krvi v laboratóriu, založená na hľadaní špeciálnych buniek – protilátok proti rôzne choroby. Metóda umožňuje nielen identifikovať patogén, ale aj zistiť, v akom štádiu je patologický proces. Ten je veľmi dôležitý pre prognózu a ďalšiu liečbu pacienta.

Výhody a nevýhody metódy

Medzi všetkými moderné metódy diagnostická ELISA je najinovatívnejšia a technicky najpresnejšia. Jeho hlavné výhody sú:

1. Schopnosť vyhľadať všetky existujúce protilátky proti infekčným chorobám v krvi pacienta.
2. Vysoká dostupnosť výskumnej metódy. Dnes môže analýzy ELISA vykonávať každé stredne veľké laboratórium.
3. Takmer 100% špecifickosť a citlivosť metódy.
4. Schopnosť hľadania protilátok a antigénov, ako aj založenie štádia patologický proces a sledovanie jeho dynamiky vďaka porovnávaniu množstva.

Takéto množstvo výhod oproti iným testom úplne zatieňuje jednu a jedinú nevýhodu analýzy: je schopná detegovať protilátky, ale nie samotný patogén.

Základné pojmy hodnotenia analýzy

Aby ste pochopili, čo je analýza ELISA, čo to je a ako sa vykonáva, musíte sa oboznámiť so základnými pojmami, ktoré používajú odborníci.

1. Protilátka- proteín, ktorý produkujú bunky ľudského imunitného systému (lymfocyty typu B). Reagujú špecifickou reakciou na požitie cudzieho činidla alebo látky. Ďalším názvom protilátok sú imunoglobulíny, patria do rôznych tried: A, E, M, G. Líšia sa od seba hmotnosťou, rýchlosťou odozvy, polčasom rozpadu a množstvom ďalších charakteristík. Bežne ľudská krv obsahuje najmä imunoglobulíny triedy G. Ak dôjde k akejkoľvek infekcii, prudko sa zvýši množstvo imunoglobulínov A a M. Imunoglobulíny E sa podieľajú na alergických reakciách.
2. Antigén- cudzorodý prostriedok organického pôvodu a vysokej molekulovej hmotnosti. Najčastejšie ide o patogény alebo ich biologicky aktívne látky.
3. Komplex antigén-protilátka alebo imunitný komplex je priamo kombináciou cudzorodej látky a imunoglobulínu, ktorá vyvoláva imunitnú odpoveď.

Podstata a rozsah metódy

Pacienti majú často otázku: ELISA analýza, čo to je, ako sa vykonáva a na čo slúži? O metóde môžete hovoriť prístupným spôsobom stručným popisom jej fáz.

Prípravná fáza. Laboratórny lekár používa špeciálnu platňu s 96 jamkami. Na povrch každej jamky sa aplikuje antigén špecifického patogénu.

1. fáza Odoberá sa krv, ktorá sa potom po kvapkách aplikuje do jamky. Jamka spustí reakciu medzi antigénom a protilátkou v krvi.

2. fáza V studni je reakcia v plnom prúde s tvorbou imunitných komplexov. V dôsledku toho sa vytvorí látka určitej farby. Intenzita farby závisí od množstva protilátok v krvi pacienta na každý konkrétny patogén.

3. fáza Vyhodnotenie výsledku fotometriou. Na to sa používa špeciálne zariadenie nazývané spektrofotometer. Porovnáva hustotu materiálu v jamke a kontrolnej vzorky. Ďalej zariadenie generuje výsledok matematickou analýzou.

Vyhodnotenie výsledkov a účel ELISA

Interpretácia výsledku závisí od niekoľkých dôležitých nuancií:

1. Optická hustota studne.
2. Výrobca platní pre studne (testovacie systémy).
3. Laboratórium, kde bola štúdia vykonaná.

Vzhľadom na tieto nuansy by ste nikdy nemali porovnávať dva výsledky z rôznych testovacích systémov alebo z rôznych laboratórií.

Ďalším dôležitým bodom, ktorý ovplyvňuje analýzu ELISA, je takzvaná avidita protilátok. Tento parameter charakterizuje množstvo antigénu, silu väzby v komplexe antigén-protilátka. Jeho definícia je založená na ošetrení imunitného komplexu močovinou s cieľom vyriešiť proteínové štruktúry. To vám umožní zničiť slabé väzby medzi antigénom a protilátkou a ponechať len silné. Význam štúdie pre aviditu spočíva v tom, že pomocou nej možno zistiť trvanie infekcie. Tieto informácie sú mimoriadne dôležité pre diagnostiku tehotných žien.

Krvný test ELISA slúži na:

1. Na vyhľadávanie rôznych antigénov patogénov.
2. Študovať hormonálne pozadie.
3. Na test na prítomnosť autoimunitného ochorenia.
4. Na detekciu markerov onkologické ochorenia.

Odrody ELISA

Analýza ELISA má tieto odrody:

1. Nepriame.
2. Rovno.
3. Konkurencieschopný.
4. metóda blokovania.

Ale v skutočnosti sa dnes používa iba metóda nazývaná ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). Je založená na vyššie opísanej reakcii tvorby komplexu antigén-protilátka so zmenou farby na povrchu jamky.

Osobitnú pozornosť si zaslúži priamo kvantitatívny krvný test ELISA. Toto nie je typ analýzy, ale spôsob hodnotenia výsledkov. Vďaka nemu sa počíta počet protilátok a určujú sa ich triedy. Výsledok závisí od optickej hustoty vzorky, testovacieho systému, na ktorom bola ELISA vykonaná, a tiež od laboratória.

Choroby zistené testom ELISA

ELISA je krvný test, ktorý vám umožňuje identifikovať obrovské množstvo rôznych infekčných chorôb. Okrem toho sa vírusové aj bakteriálne ochorenia detegujú s rovnakou presnosťou. Napríklad pomocou tvorby imunitných komplexov je možné dokázať prítomnosť antigénov pôvodcov nasledujúcich chorôb:

Okrem toho vám ELISA umožňuje zistiť:

1. Rakovinové markery - TNF (tumor necrosis factor), PSA (prostatický špecifický antigén), CEA (rakovinovo-embryonálny antigén), CA-125 (ovariálny nádorový marker)
2. Tehotenský hormón je hCG (ľudský choriový gonadotropín).
3. Porušenia reprodukčný systém: hormóny ženského a mužského reprodukčného systému.
4. Patológia štítnej žľazy.

Je dôležité spomenúť, že test ELISA na HIV je dnes hlavným spôsobom diagnostiky tohto nebezpečného ochorenia.

Materiál ELISA a technika odberu vzoriek

Na vykonanie testu ELISA sa pacientovi odoberie krv na prázdny žalúdok. Ďalej sa z krvi získava sérum, ktoré sa priamo používa na analýzu. Okrem toho je možné ELISA vykonať na cerebrospinálnom moku (CSF), hliene cervikálneho kanála (krčka maternice), plodovej vode a dokonca aj tekutine sklovité telo(očná guľa).

Pred darovaním krvi je pacient upozornený, že by nemal užívať žiadne lieky a liečbu antibiotikami a antivírusové lieky odporúča sa skončiť aspoň dva týždne pred odberom krvi.

Podmienky prijatia a interpretácie výsledkov

Načasovanie prijatia odpovede z laboratória nezávisí od rýchlosti jeho práce, ale od štádia ochorenia a od toho, aké protilátky sa už objavili v krvi. Napríklad: imunoglobulíny M sa objavia približne 2 týždne po odbere krvi na analýzu a znamenajú, že proces je v štádiu primárnej infekcie alebo došlo k exacerbácii chronickej. Zároveň sa pri primárnej infekcii objavujú protilátky triedy M a G. Okrem toho sa dá zistiť po 4 týždňoch.

IgA sa objaví po 2-3 týždňoch buď samostatne alebo spolu s M, čo naznačuje akútnu infekciu, alebo spolu s G, čo naznačuje chronický proces.

Takéto rôzne dátumy výskyt protilátok v krvi spôsobí, že pacient bude dlho čakať na výsledok. Po vykonaní analýzy ELISA je prijateľné počkať viac ako mesiac. Dekódovanie a interpretácia lekárom tiež trvá určitý čas.

S pokrokom moderná medicína v prípade podozrenia na určité patológie u pacienta je možné vykonať hlbšiu diagnostiku. Jedna z informatívnych metód laboratórny výskum bola analýza ELISA, ktorá sa vykonáva metódou odberu venóznej krvi. To znamená, že pre pacienta ako celok sa nič nemení. Laboratórny asistent ELISA však vykonáva komplexnú techniku ​​​​na štúdium zozbieraného biomateriálu. Čo sú analýzy ELISA a aké sú jemnosti použitia metódy ELISA ako diagnostickej, rozumieme nižšie uvedenému materiálu.

Čo je to enzýmový imunotest?

Produkciu protilátok vyvolávajú samotné antigény, ktoré sa dostali do ľudského tela. Pri vstupe do „bitky“ o zdravie tela sa protilátky akoby označovali antigénmi, čo laboratórny asistent vidí v krvnom teste. To znamená, že v zozbieranom biomateriáli je možné sledovať nielen prítomnosť infekcie, ale aj jej stopy po úplnom zotavení tela.

Teda priraďovanie spojený imunosorbentný test krvi pacientovi, môže ošetrujúci lekár sledovať trvanie infekcie, stupeň jej progresie alebo identifikovať prítomnosť imunity voči konkrétnej infekcii.

Diagnostický proces ELISA vyzerá takto:

• Odobratá venózna krv sa v laboratóriu uvedie do stavu krvného séra;
• Potom laborant použije špeciálnu tácku s bunkami, z ktorých každá už obsahuje všetky potrebné antigény. Do každej bunky stačí nakvapkať krvné sérum a sledovať reakciu imunoglobulínov (protilátok) na antigény. Prítomnosť „požadovanej“ reakcie je indikovaná zmenou farby študovaného materiálu. V budúcnosti laborant študuje optickú hustotu skúmaného média.

• Ascariáza a enterobiáza (škrkavky a červy);
• trichinelóza;
• Opisthorchiáza v akútnych a chronických formách;
• Giardiáza;
• amébióza;
• toxoplazmóza;
• Leishmanióza v akejkoľvek forme.

Dôležité: enzýmový imunotest môže byť kvalitatívny aj kvantitatívny. V prvom prípade laborant iba potvrdí alebo vyvráti prítomnosť požadovanej látky v krvi. V druhom prípade je v dôsledku analýzy indikovaná jeho koncentrácia v tele pacienta.

Nevýhody metódy

So všetkými výhodami tejto diagnostickej metódy treba chápať, že enzýmová imunoanalýza nie je spôsob, ako nájsť príčinu pacientovho ochorenia, ale iba spôsob potvrdenia diagnózy uvádzanej ošetrujúcim lekárom. A vzhľadom na to, že štúdia je dosť drahá, treba ju používať rozumne. V tomto prípade by mal výsledky štúdie interpretovať iba kvalifikovaný odborník.

Dešifrovanie výsledkov

Potom, čo sme rozobrali skratku IFA a čo to je ─ zistil, stojí za to prejsť k interpretácii výsledkov. Tu je dôležité pochopiť, že ak bola analýza vykonaná kvalitatívne, výsledok bude iba pozitívny alebo negatívny. To znamená, že diagnóza buď potvrdí podozrenie lekára o konkrétnej diagnóze, alebo ich vyvráti. V tomto prípade bude formulár obsahovať symboly „+“ alebo „-“.

Dôležité: Negatívny výsledok testu nemusí vždy znamenať neprítomnosť infekcie. Faktom je, že protilátky proti antigénom sa môžu vytvoriť do 14 dní po infekcii a je pravdepodobné, že sa ešte nevytvorili.

Ak sa vykonáva kvantitatívna analýza, potom sa tu určuje typ protilátok, ich počet a stupeň aktivity. Najmä pri takejto diagnóze sa stanovujú protilátky (imunoglobulíny) IgG a IgM, ktoré sa tvoria v rôznych obdobiach progresie infekcie. Najbežnejšie výsledky v tomto prípade sú:

• Zvýšené IgM a úplná absencia IgG. Tento obrázok naznačuje nedávnu infekciu a akútnu fázu patológie.
• Zvýšená aktivita oboch typov imunoglobulínov (IgM a IgG). Hovorí o dlhodobom a chronickom priebehu infekčného procesu.
• IgG aktivita a úplná absencia IgM. Infekcia bola najmenej pred šiestimi mesiacmi a teraz je vírus v zdĺhavom chronickom štádiu.
• Absencia protilátok IgG a IgA. Výsledok nie je definovaný.
• Absencia protilátok IgM, IgA a IgG. Označuje nedostatočnú imunitu voči špecifickej infekcii.
• Aktivita protilátok IgG, IgM a IgA naznačuje exacerbáciu chronického procesu.

Laborant v osobitnom stĺpci formulára okrem identifikácie typov protilátok uvádza aj ich počet na objem krvi. Pamätajte, že keď ste pochopili, čo je metóda ELISA, neinterpretujte výsledky sami. Získané výsledky môže s presnosťou interpretovať iba ošetrujúci lekár v závislosti od navrhovanej diagnózy, postavenej na základe klinický obraz u pacienta.

Najčastejšie sa v praxi používajú tri varianty imunoanalýzy na tuhej fáze – nepriama imunoanalýza, priama imunoanalýza a imunoanalýza sendvičového typu. Rozdiely medzi týmito typmi imunotestov sú nasledovné. V nepriamej verzii imunoanalýzy sa antigén v prvom stupni sorbuje na povrchu jamiek polystyrénovej platne. Po odstránení nenaviazaných molekúl antigénu sa pridá vzorka obsahujúca protilátky špecifické pre daný antigén. Výsledné komplexy antigén-protilátka sa detegujú pomocou protidruhových protilátok konjugovaných so značkou (obr. 1A). V priamej verzii imunotestu sa detekcia adsorbovaného antigénu uskutočňuje priamo pomocou špecifických protilátok konjugovaných so značkou (obr. 1B). V imunoteste sendvičového typu sa v prvej fáze neadsorbuje na povrchu platne antigén, ale protilátky špecifické pre skúmaný antigén (protilátky substrátu). Po odstránení nenaviazaných molekúl protilátky sa pridá vzorka obsahujúca antigén. Na detekciu vytvoreného komplexu substrát-antigén protilátka sa pridajú druhé protilátky špecifické pre iný, priestorovo vzdialený antigénový epitop, konjugovaný s nejakou značkou (obr. 1B). Použitie protilátok sendvičového typu špecifických pre dva rôzne epitopy antigénu v imunoteste umožňuje dosiahnuť vysokú citlivosť a špecificitu pri stanovení antigénu aj v takých heterogénnych vzorkách, ako je krvná plazma.

Ryža. 1. Princíp nepriamej (A), priamej (B) a sendvičovej imunoanalýzy (C)

Nepriama enzýmová imunoanalýza (nepriama ELISA)

Metóda nepriameho imunotestu sa vyznačuje realizáciou 3-stupňového procesu, v prvom stupni sa antigén adsorbuje na špeciálne pripravenom plaste, v druhom stupni interagujú špecifické protilátky s antigénom a v treťom stupni anti -druhové protilátky sú zavedené do systému, konjugované s enzýmom, ktorý určuje indikátor enzymatickej reakcie. Pri tejto metóde sa ako enzým používa chrenová peroxidáza. Reakcia sa uskutočňuje na špeciálnych 96-jamkových platniach.

I. Sorpcia antigénu

V jamkách 96-jamkovej platne na imunotest absorbujte antigén 0,1-0,5 ug na jamku v 100 ul fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku (PBS). Inkubácia sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti a pretrepáva sa na horizontálnej doskovej trepačke. Premytie (2-násobné) nenaviazaných molekúl antigénu sa uskutoční fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom obsahujúcim 0,1 % Tween-20 (PBST).

II. blokovanie

Na blokovanie nešpecifických väzbových miest sa jamky tablety naplnia PBST a inkubujú sa 10 až 15 minút pri teplote miestnosti.

III. Farbenie špecifických protilátok

Screening je možné vykonávať v horizontálnych aj vertikálnych radoch tabletu. Treba poznamenať, že triturácia protilátky sa vykonáva, ak je potrebné vybrať optimálnu koncentráciu protilátok alebo určiť titer. V prípade, že sa stanoví optimálna koncentrácia a/alebo titer protilátok, potom sa použije riedenie odporúčané pre tieto špecifické protilátky.

Pri triturácii sa do prvej jamky v rade zavedie hotové riedenie protilátok - v priemere 1 až 10 μg na jamku, potom sa v jamkách uskutoční postupné riedenie protilátok. Inkubácia so špecifickými protilátkami sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti a pretrepáva sa na horizontálnej trepačke platní. Premytie sa uskutoční PBST 3-krát.

IV. Pridanie protidruhových protilátok konjugovaných s enzýmovou značkou

Ako detektorové (sekundárne) protilátky sa používajú protidruhové polyklonálne protilátky konjugované s chrenovou peroxidázou. Najčastejšie sa používajú kozie alebo králičie protilátky, špecifické pre celú molekulu alebo pre Fc fragmenty špecifických protilátok. Koncentráciu detekčných protilátok výrobca zvyčajne udáva ako riedenie zásobného roztoku (napríklad 1:1000). Inkubácia so sekundárnymi protilátkami sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti a pretrepáva sa na horizontálnej trepačke platní. Premytie sa uskutoční PBST 5-6 krát.

Chrenová peroxidáza katalyzuje reakciu oxidácie substrátu s peroxidom vodíka. O-fenyléndiamín (OPD) sa používa ako substrát pre chrenovú peroxidázu. V dôsledku reakcie sa vytvorí farebný oxidačný produkt OPD.

Roztok substrátu: Do 10 ml substrátového tlmivého roztoku (0,1 M Na-citrátový tlmivý roztok, pH 4,5) pridajte 0,01 ml 30% peroxidu vodíka a 0,2 ml 50x roztoku OFD (340 mg OFD v 10 ml etanolu; skladujte pri -20 °C).

Inkubácia sa uskutočňuje počas 10 minút pri teplote miestnosti a pretrepáva sa na horizontálnej trepačke platní.

V. Zastavenie enzymatickej reakcie

VI. Meranie optickej hustoty

Priama enzýmová imunoanalýza (priama ELISA)

Metóda priameho imunotestu má len malé rozdiely v porovnaní s metódou nepriameho imunotestu. Kroky I a II sú teda rovnaké v oboch typoch analýzy. Rozdiel spočíva v tom, že v priamej verzii III. štádia imunoanalýzy sa používajú špecifické protilátky konjugované s enzýmovou značkou. Ak je to potrebné, je tiež možné uskutočniť trituráciu špecifických protilátok konjugovaných s enzýmovou značkou, podobne ako bolo opísané vyššie pre nekonjugované protilátky. Stupeň IV sa vynechá a ďalšie stupne (V-VII) sa uskutočnia rovnakým spôsobom, ako je opísané vyššie pre nepriamy variant imunotestu.

Imunoanalýza sendvičového typu

Ryža. 2. Schematické znázornenie imunotestu "sendvičového" typu. ATp je substrátová protilátka, ATd je detekčná protilátka, AG je antigén, M je značka kovalentne naviazaná na detekčnú protilátku, P je substrát, na ktorý je substrátová protilátka adsorbovaná.

V tomto variante imunoanalýzy (obr. 2) je použitý pár protilátok špecifických pre priestorovo vzdialené epitopy študovaného antigénu.

I. Sorpcia protilátok na substrát

V jamkách 96-jamkovej platne na imunotest absorbujte protilátkový substrát 1-2 ug na jamku v 100 ul fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku (PBS). Inkubácia sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti a pretrepáva sa na horizontálnej doskovej trepačke. Premytie (2-násobné) nenaviazaných molekúl antigénu sa uskutoční fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom obsahujúcim 0,1 % Tween-20 (PBST).

II. blokovanie

Na blokovanie nešpecifických väzbových miest sa jamky naplnia PBST a inkubujú sa 10 až 15 minút pri teplote miestnosti.

III. Inkubácia s antigénom

Do jamiek tablety s predadsorbovanými protilátkami pridajte 50 μl testovacieho roztoku alebo štandardných riedení antigénu. Riedenie antigénu by sa malo pripraviť z PBST, pretože Tween-20 znižuje nešpecifickú väzbu proteínových molekúl medzi sebou a na povrch platne. Testovaný roztok aj štandardné riedenia antigénu sa pridajú v pároch (alebo 3 replikátoch), pričom sa použijú dve (tri) jamky pre každé riedenie proteínu. Inkubácia sa uskutočňuje pri teplote miestnosti počas 30 minút za stáleho miešania. Premytie sa uskutoční 3-krát roztokom PBST.

IV. Inkubácia s enzýmom značenými protilátkami

Do jamiek tablety sa pridá 100 μl roztoku špecifických protilátok konjugovaných s enzýmovou značkou. Optimálna koncentrácia konjugovaných protilátok je zvyčajne špecifikovaná výrobcom (zvyčajne sa používa koncentrácia 2-4 µg/ml). Inkubácia s protilátkami obsahujúcimi enzýmovú značku sa uskutočňuje počas 30 minút pri teplote miestnosti a pretrepáva sa na horizontálnej trepačke platní. Premytie sa uskutoční PBST 5-6 krát.

V. Uskutočnenie enzymatickej reakcie sprevádzané objavením sa farebného produktu

Do jamiek sa pridá 100 ul roztoku substrátu a inkubuje sa 10 minút pri teplote miestnosti za stáleho miešania.

VI. Zastavenie enzymatickej reakcie

Pred meraním optickej hustoty sa farebná reakcia zastaví pomocou 0,5 M H2S04. Po inkubácii sa do jamiek s pracovným roztokom OFD pridá 50 μl 0,5 M roztoku kyseliny sírovej. Potom môžete okamžite začať merať optickú hustotu.

VII. Meranie optickej hustoty

Optická hustota roztoku farebného produktu sa meria pri A = 490 nm pomocou platňového spektrofotometra.

V zozname štandard diagnostické opatrenia používané pri infekčných ochoreniach zahŕňa enzýmový imunotest. Ak je test ELISA na syfilis pozitívny, neprepadajte okamžite panike.

Pozrime sa podrobnejšie na vlastnosti tejto metodológie výskumu a princípy dešifrovania výsledkov získaných v rôzne kategórie pacientov.

Enzýmová imunoanalýza je jednou z najbežnejších metód diagnostiky infekčných ochorení. Patrí do kategórie treponémových testov, to znamená, že sa môže použiť na určenie prítomnosti pôvodcu syfilisu - bledého treponému v tele pacienta.

Pomocou ELISA sa syfilis zisťuje v dôsledku detekcie protilátok proti treponému. Sú obsiahnuté v krvi pacienta a ich typ a množstvo závisia od štádia a formy ochorenia, čo vám umožňuje získať dôležitá informácia o aktuálnom stave ľudského zdravia.

Výhody a nevýhody

ELISA sa veľmi často predpisuje pri podozrení na syfilis alebo iné infekčné choroby. Dôvodom je skutočnosť, že analýza vám umožňuje identifikovať presný typ a štádium choroby a jej spoľahlivosť zostáva na vysokej úrovni - pravdepodobnosť chyby na základe výsledkov viacerých štúdií je iba 1%, primárna ELISA má presnosť asi 90 %.

Použitie vysokokvalitných činidiel a moderného vybavenia nám umožňuje maximalizovať presnosť indikátorov.

Vo všeobecnosti sú výhody metódy:

1. Vysoká presnosť výsledku. Pravdepodobnosť prijatia falošných údajov je veľmi malá.
2. Minimalizácia vplyvu ľudského faktora. Moderné vybavenie na vykonávanie ELISA vylučuje ľudský vplyv na výsledky štúdie z dôvodu automatizácie procesu.
3. Detekcia špecifických protilátok. Nie je možné zamieňať antigény jedného typu s inými, takže analýza ukazuje presný výsledok pre konkrétnu diagnózu.
4. Oprava najmenších odchýlok od normy. Dokonca aj najmenšia koncentrácia patologických činiteľov nezostane bez povšimnutia.

Nezabudnite na slabé stránky tejto metódy. ELISA má nasledujúce nevýhody:

1. Vysoká cena. Vysoké náklady sú spôsobené mnohými faktormi, najmä potrebou dobrého vybavenia, vysokokvalitných činidiel a odborníkov s dostatočnou úrovňou školenia.
2. Potreba predbežnej diagnózy. Musíte vedieť, ktoré antigény hľadať, pretože bez dodatočných údajov nebude možné stanoviť presnú diagnózu.
3. Pravdepodobnosť falošne pozitívneho výsledku. Niektoré telesné podmienky a iné faktory môžu skresliť konečné údaje.

Indikácie na vykonávanie

Lekár môže predpísať enzýmový imunotest na diagnostiku nielen syfilisu, ale aj mnohých iných infekčných ochorení.

Ak vezmeme do úvahy situáciu priamo s infekciou treponémom, dôvodom vyšetrenia môže byť:

• objavenie sa vonkajších príznakov ochorenia (chancres, syfilitická vyrážka, ďasná atď.);
• výrazné zníženie imunity;
• identifikácia alebo podozrenie na syfilis u sexuálneho partnera, príbuzných a rodinných príslušníkov;
• pozitívna reakcia počas iných testov;
• identifikácia iných chorôb, ktoré môžu byť spojené so syfilisom;
• osobná túžba človeka byť vyšetrený.

Spôsoby vykonávania

Môže sa uskutočniť ELISA rôzne cesty. V každom prípade sa vyberie najvhodnejšia možnosť.

V prvom rade existuje rozdelenie metód na:

1. Kvalitatívne. Zisťuje sa prítomnosť infekcie alebo vírusu v tele pacienta.
2. Kvantitatívne. Určuje koncentráciu protilátok proti patogénnemu agens v ľudskom tele, čo naznačuje štádium a intenzitu vývoja ochorenia.

Existuje aj klasifikácia metód na vykonávanie ELISA podľa princípu reprodukovania potrebnej reakcie.

Sú 3 možnosti:

1. Rovno. Označené protilátky sa vstreknú do poskytnutých vzoriek krvi.
2. Nepriame s antigénmi. Adsorbované antigény sa predbežne umiestnia do buniek polystyrénovej platne určenej na ELISA. Potom sa k nim pridávajú protilátky vírusov, čo vyvoláva tvorbu imunitných komplexov potrebných na ďalšie vyhodnotenie výsledkov.
3. Nepriame s protilátkami. Pri pohlavne prenosných chorobách sa táto metóda často používa. Zahŕňa predbežnú sorpciu protilátok, až potom sa na platňu pridávajú antigény.

Pravidlá odberu vzoriek materiálu

Aby sa znížilo riziko získania falošných výsledkov, je potrebné darovať krv na analýzu správne.

Pred podstúpením testu ELISA je potrebné dodržiavať niektoré obmedzenia:

• vyhnúť sa silnému fyzickému a emocionálnemu stresu;
• prestať fajčiť a piť alkohol aspoň 1 až 3 dni vopred;
• na niekoľko dní musíte prejsť na správnu výživu;
• je žiaduce, aby ženy kontrolovali fázu menštruačného cyklu, pretože hormóny môžu skresliť výsledky;
• posledné jedlo by malo byť 8-10 hodín pred darovaním krvi;
• počas 10 dní sú vylúčené lieky, ktoré môžu ovplyvniť výsledky štúdie.

Na ELISA sa odoberá venózna krv z loketnej žily, treba ju odobrať ráno nalačno. Vo všeobecnosti platia štandardné pravidlá prípravy na odber žilovej krvi. V závislosti od toho, ktoré ochorenie sa testuje, môžu platiť ďalšie požiadavky. predbežná príprava pacient.

Metodológia

Pokyny na vykonanie testu ELISA sú pomerne jednoduché:

1. Pacient odoberá krv zo žily.
2. Odobratý materiál sa pripravuje a delí na vzorky na špeciálnej jemnozrnnej palete.
3. Antigény sa zmiešajú s protilátkami podľa zvolenej metódy.
4. Reakcia sa vyhodnotí. Vzorky sa porovnajú s kontrolnými vzorkami, vykoná sa kvalitatívne a kvantitatívne vyhodnotenie výsledkov.
5. Údaje sa zapisujú do špeciálnej tabuľky s aplikáciou kvantitatívnych ukazovateľov (celkové protilátky).
6. Ošetrujúci lekár dešifruje výsledky. V prípade potreby je predpísaná vhodná liečba.

Po vyšetrení dostane pacient dokument s výsledkami. Má formu tabuľky so zodpovedajúcimi označeniami oproti každému typu imunoglobulínu v priesečníku s názvami infekčných chorôb.

Dešifrovanie

Iba odborník bude schopný správne dešifrovať výsledky analýz. Je ťažké prísť na to sami, čo znamená napríklad výsledok ELISA k = 1 4. Syfilis sa môže vyskytovať aj v rôznych formách, čo tiež ovplyvňuje konečné údaje.

Výsledky naznačujú 3 typy imunoglobulínov:

1. IgM. Umožnite určiť obdobie infekcie syfilisom. Pozitívny výsledok naznačuje exacerbáciu ochorenia. Ich absencia môže naznačovať remisiu chronických patológií alebo latentnú formu ochorenia.
2. IgA. Označuje ochorenie, ktoré je staré viac ako mesiac od infekcie. Je to tiež znak akútnej fázy ochorenia, a to ako s bežnými patológiami, tak aj s pokročilými chronickými.
3. IgG. Je to znak vrcholného obdobia ochorenia, to znamená jeho exacerbácie. Pri syfilise sa pozitívna reakcia objaví po určitom čase po liečbe. Pri niektorých typoch ochorení môže byť príznakom vyvinutej imunity.

Tieto látky telo produkuje v určitom poradí, čo je ďalším znakom choroby. Pri kvalitatívnych testoch sa zisťuje iba prítomnosť imunoglobulínov v krvi každého typu.

To je vyjadrené v zmene farby materiálov zahrnutých do analýzy. Kvantitatívne ukazovatele sú pomocné, presnejšie vystihujú situáciu. Pomer antigénov a protilátok udáva závažnosť ochorenia a intenzitu reakcie organizmu.

Čo robiť

Ak má pacient skutočne syfilis, pozitívny test ELISA sa zistí absolútne vždy, v takejto štúdii je nemožné nevšimnúť si prítomnosť treponémov. Nezúfajte, choroba dobre reaguje na liečbu, najmä v počiatočných štádiách.

Čo robiť, ak je výsledok testu pozitívny:

• podrobiť sa ďalším vyšetreniam podľa indikácií lekára;
• absolvovať kurz antibiotickej terapie podľa zvolenej schémy;
• zamerať sa na posilnenie imunitného systému;
• informujte svojho sexuálneho partnera o chorobe;
• v budúcnosti pravidelne podstupovať preventívnu diagnostiku až do odhlásenia v ambulancii (po 5 rokoch pri absencii pozitívnych výsledkov testov).

Netreba odkladať nemocenské a báť sa zverejňovania výsledkov. Diagnóza je zašifrovaná a zostáva utajená, len ak hrozí nákaza iným ľuďom, je potrebné o probléme informovať príbuzných a sexuálneho partnera, aby absolvovali požadované vyšetrenia.

Falošne pozitívny výsledok a jeho príčiny

Niekedy sa zaznamená výsledok iných testov a test ELISA je falošne pozitívny na syfilis. Preto sa odporúča vykonať 2 - 3 pomocné metódy a po chvíli zopakujte enzýmový imunotest.

Takéto nepresnosti sú zriedkavé, sú spôsobené najmä týmito faktormi:

• tehotenstvo;
• chronické choroby;
• nedávne očkovanie;
• zranenie.

Falošne pozitívne výsledky sú rozdelené na akútne a chronické v závislosti od povahy faktora, ktorý ich vyvolal.

Hlavné sú uvedené v tabuľke:

Pri týchto zdravotných problémoch môže ukázať test na syfilis pozitívny výsledok, ale to je len dôsledok produkcie bielkovín v tele na boj s chorobou. ELISA ich však rozpoznáva ako antigény.

Zdravé dieťa do jedného a pol roka môže mať falošne pozitívne výsledky ELISA, ak bola žena infikovaná syfilisom počas tehotenstva. Pred týmto vekom sa krv ešte nestihne úplne obnoviť, preto sa v nej môžu nachádzať matkine protilátky. Výnimkou je situácia s detekciou imunoglobulínov IgM.

Viac o vlastnostiach enzýmovej imunoanalýzy a jej metodike sa dozviete sledovaním videa v tomto článku.