Buning uchun eritrotsitlar yoki neytral sintetik materiallar (masalan, lateks zarralari) ishlatiladi, ularning yuzasida antijenler (bakterial, virusli, to'qima) yoki antikorlar adsorbsiyalanadi. Ularning aglutinatsiyasi tegishli sarumlar yoki antijenler qo'shilganda sodir bo'ladi. Antigenlar bilan sensibilizatsiyalangan qizil qon hujayralari antigenik eritrotsit diagnostikum deb ataladi va antikorlarni aniqlash va titrlash uchun ishlatiladi. Antikorlar bilan sezgir bo'lgan eritrotsitlar. immunoglobulin eritrotsit diagnostikumlari deb ataladi va antigenlarni aniqlash uchun ishlatiladi.

Passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi bakteriyalar (tif va paratif, dizenteriya, brutsellyoz, vabo, vabo va boshqalar), protozoa (bezgak) va viruslar (gripp, adenovirus infektsiyalari, virusli gepatit B, qizamiq, shomil) keltirib chiqaradigan kasalliklarni aniqlash uchun ishlatiladi. ensefalit, Qrim gemorragik isitmasi va boshqalar), shuningdek, ayrim gormonlarni aniqlash, bemorning yuqori sezuvchanligini aniqlash. dorilar va penitsillin va insulin kabi gormonlar.

Passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RPHA). Passiv gemagglyutinatsiya testi serologik diagnostikaning sezgir usuli bo'lib, erta va retrospektiv diagnostika, shuningdek, emlangan odamlarning immunologik holatini aniqlash uchun ishlatiladi. Tulyaremiya bilan og'rigan bemorlarda antikorlar odatda kasallikning 1 yoki 2 haftasi oxirida aniqlanadi, 1-1,5 oydan keyin TPHA titrlari maksimal qiymatlarga etadi (1: 100 000-1: 20 000, kamroq tez-tez yuqori), shundan keyin ular 1:100-1:200 darajasida pasayib, uzoq vaqt saqlanib qoladi.

Emlanganlarda antikorlar ham doimiy ravishda aniqlanadi, ammo pastroq titrlarda, emlashdan 1-1,5 oy o'tgach, 1:2000-1:5000 dan oshmaydi, ular bir necha yil davomida 1:20-1:80 past darajada qoladi.

Tularemiya eritrotsit diagnostikum (antigenik) RPHA ni o'rnatish uchun antijen bo'lib xizmat qiladi. Preparat suyuq va quruq shaklda mavjud bo'lgan tulyaremiya antijeni bilan sensibilizatsiyalangan qo'chqor eritrotsitlari formalindir. Suyuq preparat - 10% konsentratsiyali formalin eritmasida eritrotsitlarning 10% suspenziyasi. Quruq liyofillangan preparat - konservantsiz eritrotsitlarning vakuumda quritilgan 10% suspenziyasi. Ishlatishdan oldin u yorliqdagi ko'rsatmalarga muvofiq suyultiriladi. Polistirol plitalaridagi reaktsiyani o'rnatish uchun ikkala dori ham 2,5% konsentratsiyada va mikrotomiyalarda reaktsiyani o'rnatishda 0,5% konsentratsiyada qo'llaniladi.

RPGA sozlash texnikasi. Sinov sarumlari 1:5 (1:10) sho'r suv bilan suyultiriladi va 30 daqiqa davomida 56 ° C da isitiladi. Shundan so'ng, qo'chqor eritrotsitlariga heterojen antikorlarni olib tashlash uchun sarumlar 50% li rasmiylashtirilgan qo'chqor eritrotsitlari suspenziyasi bilan ishlov beriladi. Buning uchun eritrotsitlar 1 ml sarumga 2 tomchi (0,05 ml) miqdorida qo'shiladi va chayqatish orqali yaxshilab aralashtiriladi. Sarum eritrotsitlar to'liq cho'kmaguncha qoldiriladi yoki xona haroratida bir soatdan keyin santrifüjlanadi, shundan so'ng u tadqiqotga tayyor bo'ladi.

Suyultirilgan suyuqlik polistirol plitasining bir qator quduqlariga 0,5 ml hajmda quyiladi. Sarumlarni dastlabki o'rganishda ularni plastinkaning qisqa qatoriga (6-teshik) reaktsiyani o'rnatish orqali tekshirish tavsiya etiladi. Qisqa zardoblarda antikorlar aniqlangan taqdirda, zardoblar suyultirishning uzoq seriyalarida (12 quduq) qayta tekshiriladi. Suyultiruvchi suyuqlik to'kilgandan so'ng, har bir qatorning birinchi qudug'iga (qisqa yoki uzun) 0,5 ml 1:5 suyultirilgan sinov zardobi qo'shiladi. Keyin bir xil hajmlarda sarum ikki marta suyultirish bilan titrlanadi. Shunday qilib, sarum suyultirishlari qisqa ketma-ketlikda 1:10 dan 1:320 gacha, uzoqda esa 1:10 dan 1:20480 gacha olinadi. Sarumlarni titrlashdan so'ng, har bir quduqqa bir tomchi (0,05 ml) sezgir eritrotsitlarning 2,5% li ish suspenziyasi qo'shiladi. Plitalarning tarkibi bir hil suspenziya olinmaguncha yaxshilab chayqatiladi. Plitalar xona haroratida stolning statsionar yuzasida qoldiriladi. Reaksiyani dastlabki ro'yxatga olish 2-3 soatdan keyin amalga oshiriladi, titrni yakuniy aniqlash quduqlarda eritrotsitlarning to'liq cho'kishidan keyin amalga oshiriladi. Reaksiya uchun quyidagi nazorat vositalari nazarda tutilgan: 1) 0,5 ml hajmda 1:10 suyultirilganda sinov zardobi + 2,5% li sensibilizatsiyalanmagan eritrotsitlar suspenziyasidan 1 tomchi; 2) 0,5 ml hajmdagi suyultiruvchi suyuqlik + sezgir bo'lmagan eritrotsitlarning 2,5% suspenziyasidan 1 tomchi; 3) 0,5 ml hajmdagi suyultiruvchi suyuqlik + sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarning 2,5% suspenziyasidan 1 tomchi. Barcha nazorat aniq salbiy reaktsiya berishi kerak.

RPGA ni hisobga olish va baholash. Reaktsiya quyidagi sxema bo'yicha baholanadi:

1) keskin ijobiy reaktsiya(++++) - eritrotsitlar quduq tubiga bir xil qatlamda "soyabon" ko'rinishida tushadi, uning qirralari ko'pincha qirrali;

2) ijobiy reaktsiya (+++) - eritrotsitlar teshikning pastki qismining kamida 2/3 qismini qoplaydi;

3) zaif ijobiy reaktsiya (++) - aglyutinat kichik va teshikning eng markazida joylashgan;

4) shubhali reaktsiya (+) - teshikning eng markazida eritrotsitlar cho'kmasi atrofida aglyutinatning alohida donalari mavjud;

5) salbiy (-) - teshikning pastki qismida eritrotsitlar "tugma" yoki silliq, keskin aniqlangan qirralari bo'lgan kichik halqa shaklida joylashadi.

Sarum titri oxirgi sarum suyultirilishiga ko'ra hisobga olinadi, bu juda aniq reaktsiya (kamida uchta plyus) berdi. 1:100 va undan yuqori suyultirish diagnostik titr hisoblanadi, ammo RA holatida bo'lgani kabi, uning oshishini kuzatish kerak.

Tulyaremiyadagi TPHA juda o'ziga xos bo'lib, faqat brutselloz zardobida ba'zi o'zaro ta'sirlarni aniqlaydi. Differentsial diagnostika TPHAdagi titrlarning balandligi bilan mumkin, ular gomologik antigen bilan ancha yuqori.

Mikro hajmlarda RPHA ni o'rnatish texnikasi. RPHA takachi tipidagi mikrotitr (yoki mikropipetli dumaloq pastki mikrotitr plitalari) yordamida mikrotomiyalarda bajarilishi mumkin, bu materialni 25 µl va 50 µl hajmlarda titrlash imkonini beradi. Reaksiyalarni o'rnatish texnikasi, barcha operatsiyalar ketma-ketligi polistirolli plitalardagi tadqiqotda bo'lgani kabi. Ammo shuni yodda tutish kerakki, mikrometodning sezgirligi odatda makrometodnikidan bir marta suyultirish (ya'ni 2 marta) past bo'ladi.

Reaksiyani mikrotitrda tomizuvchi pipetka yordamida o'rnatish uchun har bir quduqqa 50 mkl hajmdagi suyultiruvchi suyuqlik kiritiladi. Keyin 50 mkl boshli titratorlardan foydalanib, boshni unga botirib, sinov sarum olinadi. Suyuqlik titrator boshini to'ldirganligiga ishonch hosil qiling. Sarumli titrator birinchi quduqqa o'tkaziladi va uni vertikal holatda ushlab, har ikki yo'nalishda bir nechta aylanish harakatlarini amalga oshiradi. Keyin titrator keyingi quduqqa o'tkaziladi va manipulyatsiya takrorlanadi. Titrlash bir vaqtning o'zida bir necha qatorda amalga oshirilishi mumkin. Butun qator titrlangandan so'ng titrator distillangan suv bilan (2 porsiyani o'zgartirgan holda) aylanish harakatlarida yuviladi, bosh qismidan tampon bilan suv chiqariladi va gorelka olovida yondiriladi.

Titrlashdan keyin quduqlarga 25 mkl eritrotsit diagnostikum qo'shiladi. RPHA diagnostikasi kontsentratsiyasi 0,5% ni tashkil qilishi kerak (ya'ni, eritrotsitlarning 2,5% suspenziyasi qo'shimcha ravishda 5 marta suyultiriladi). Eritrotsitlar qo'shilgandan so'ng, plitalar bir hil suspenziya olinmaguncha muloyimlik bilan silkitilishi kerak. Natijalarni 1-1,5 soatdan keyin yozib olish mumkin, bu mikrotitrda RPHA ning muhim afzalligi hisoblanadi. Bundan tashqari, bu usul reaktsiyaning barcha tarkibiy qismlari va sinov sarumining oz miqdorini talab qiladi.

Reaksiya quyidagicha hisoblab chiqiladi:

1) "+" - to'liq gemagglyutinatsiya, bunda eritrotsitlar quduq tubiga "soyabon" shaklida bir xil qatlamda tushadi, tubining kamida 2/3 qismini egallaydi;

2) "+ -" - qisman gemagglyutinatsiya, bunda eritrotsitlar kichik o'lchamdagi bo'sh halqa shaklida pastga tushadi;

3) "-" - gemagglyutinatsiyaning yo'qligi, eritrotsitlar silliq qirrali kichik tugma yoki halqa shaklida pastki qismga tushganda.

TPHAda olingan ijobiy natijaning o'ziga xosligi uch komponentli reaktsiya - passiv gemagglyutinatsiyani (RPHA) inhibe qilish reaktsiyasi yordamida tekshirilishi mumkin.

RTPGA sozlash texnikasi. Ushbu reaktsiya RPHA ning ijobiy natijasi shubhali yoki alohida epidemiologik qiziqish uyg'otganda uning o'ziga xosligini tasdiqlash uchun o'rnatiladi. Reaktsiya mexanizmi tekshirilgan sarumga o'ldirilgan tulyaremiya bakteriyalarining suspenziyasi qo'shilganda gemagglyutinatsiyaning o'ziga xos inhibisyonidan iborat. Reaksiyada uchta komponent o'zaro ta'sir qiladi: sinov zardobi, o'ziga xos tulyaremiya antijeni va antigen eritrotsit diagnostikum RTPGA odatda 7-8 quduq qatoriga joylashtiriladi. RTPGA bilan parallel ravishda ikkinchi RPGA ni o'rnatish tavsiya etiladi. Ikki qator quduqlarga 0,25 ml suyultiruvchi suyuqlik quyiladi, so’ngra 0,25 ml hajmdagi tekshiriluvchi zardob har ikki qatorning birinchi quduqlariga qo’shiladi va titrlanadi.Ikki qator bir xil zardob suyultirmalari olinadi. Ikkinchi qatorning barcha quduqlariga 0,25 ml suyultiruvchi suyuqlik, birinchi qator quduqlariga 0,25 ml tulyaremiya bakteriyasi suspenziyasi qo'shing. Tularemiya diagnostikum ishlatiladi (1 ml ga 25 mlrd tulyaremiya bakteriyasi mavjud), ilgari 50 marta suyultiriladi. Bunday suspenziya 1 ml da 500 million bakteriya yoki 0,25 ml hajmda 125 million bakteriyani o'z ichiga oladi. Antigen qo'shilgandan so'ng, plastinka xona haroratida 1 soat davomida qoldiriladi, shundan so'ng ikkala qatorning barcha quduqlariga bir tomchi (0,05 ml) eritrotsit diagnostikum qo'shiladi, plastinka chayqatiladi va stolning tekis yuzasida qoldiriladi. Buxgalteriya hisobi 2-3 soat ichida amalga oshiriladi.

RTPGA ni hisobga olish va baholash. Agar tekshiriluvchi zardobda o'ziga xos tulyaremiyaga qarshi antitellar bo'lsa, ular qo'shilgan antigen bilan neytrallanadi va birinchi qator quduqlarda gemagglyutinatsiya sodir bo'lmaydi yoki yuqori sarum titri bilan gemagglyutinatsiya kamroq (2-4) quduqlarda kuzatiladi. TPHA bilan qator. Bunday holda, natijalarning o'ziga xosligi tasdiqlanadi. Ikkala qatorda gemagglyutinatsiya qayd etilsa, ya'ni. RTHA va RPHA natijalari mos keladi, bu test zardobida tulyaremiyaga qarshi antikorlarning yo'qligini ko'rsatadi. Bunday holda, RPHA ning asosiy natijasi o'ziga xos bo'lmagan hisoblanadi.

RTPGA ni mikrohajmlarda o'rnatish texnikasi. RTHA, shuningdek, RPHA, Takachi tipidagi mikrotiter yordamida mikro hajmlarda amalga oshirilishi mumkin. Buning uchun 0,25 mkl suyultiruvchi suyuqlik har birida 7-8 bo'lgan ikkita qatorda mikroplastinkalar quduqlariga qo'shiladi. Keyin titrator yordamida 0,25 mkl tekshiriluvchi zardob ball olinadi va ikkala qatorda titrlanadi. Shundan so'ng birinchi qatordagi har bir quduqqa 25 mkl tulyaremiya antijeni (kontsentratsiyasi 1 ml dagi 500 million tulyaremiya bakteriyasi) va ikkinchi qatorga 25 mkl suyultiruvchi suyuqlik qo'shiladi. Plitalar xona haroratida 1 soat davomida qoldiriladi, shundan so'ng ikkala qatorning barcha quduqlariga 25 mkl antigen eritrotsit diagnostikum (0,5% konsentratsiya) qo'shiladi. Natijalarni hisobga olish va baholash makro hajmdagi reaktsiyaga o'xshash tarzda amalga oshiriladi.

Bilvosita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RIGA).

RIGA ikkita versiyada qo'llaniladi: gipertenziyani aniqlash uchun ma'lum antikorlar bilan antikorlarni aniqlash uchun ma'lum antijenler bilan. Bu reaktsiya o'ziga xosdir va bakteriyalar va rikketsiyalar keltirib chiqaradigan kasalliklarni tashxislash uchun ishlatiladi. RIGA o'tkazish uchun tadqiqot maqsadiga qarab AG yoki AT ni eritrotsitlarga adsorbsiyalash yo'li bilan tayyorlangan eritrotsit diagnostikumlari qo'llaniladi (10.3-rasm). Ijobiy holatlarda eritrotsitlar aglutinatsiyasi darajasi plyuslar bilan belgilanadi. To'rt plyus sinov naychasining pastki qismini qoplaydigan eritrotsitlar (soyabon) yopishtiruvchi yupqa plyonka shakliga ega bo'lgan reaktsiyani baholaydi; qisqichbaqasimon dantelli qirralari bo'lgan plyonka mavjudligi ikkita plyus bilan ko'rsatilgan. Titr sinov materialining chegaraviy suyultirilishi sifatida olinadi, bu eritrotsitlar aglutinatsiyasini ikkita plyus bilan keltirib chiqardi.

Guruch. 10.3.

1 - eritrotsitlar; 2 - eritrotsitlar AG, 3 - konjugatsiyalangan AG, 4-AT

RGA va gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (RTGA).

Yuqorida aytib o'tilganidek, RGA eritrotsitlarning ma'lum antijenler adsorbsiyalanganda bir-biriga yopishib olish qobiliyatiga asoslanadi. Gemagglyutinatsiya uchun sinov materiali sifatida allantoik, amniotik suyuqlik, tovuq embrionlarining xorion-allantoik membranalarining suspenziyasi, viruslar bilan kasallangan hayvonlarning kulturalari yoki organlaridan suspenziyalar va ekstraktlar, mahalliy yuqumli material ishlatiladi. RGA serologik reaktsiya emas, chunki u immun zardobi ishtirokisiz sodir bo'ladi va RTGA ni o'rnatish uchun AG ning ishchi suyultirilishini yoki sinov materialida AG (virus) mavjudligini tanlash uchun ishlatiladi (masalan, gripp bilan). Reaksiyada I (0) qon guruhi bo'lgan hayvonlar, qushlar, odamlarning eritrotsitlari qo'llaniladi. Taxminan RGA ni o'rnatish uchun eritrotsitlarning 5% suspenziyasidan bir tomchi va bir tomchi sinov materiali shisha slaydga qo'llaniladi, yaxshilab aralashtiriladi. Da ijobiy natija 1-2 daqiqadan so'ng makroskopik ravishda eritrotsitlarning flokulyant aglutinatsiyasi ko'rinishini kuzating. RHA ni kengaytirilgan qatorda polistirol plitalari quduqlariga o'rnatish uchun 0,5 ml hajmdagi sho'r suvdagi sinov materialining ikki baravar ko'paytirilishi tayyorlanadi. Barcha probirkalarga eritrotsitlarning 0,25-1% suspenziyasidan 0,5 ml solinadi. Natijalar nazoratdagi eritrotsitlarning to'liq cho'kishidan keyin hisobga olinadi (eritrotsitlar + sho'r suv). Reaktsiya eritrotsitlar cho'kindisining tabiati bilan hisobga olinadi. Ijobiy holatlarda aglutinatsiya darajasi plyuslar bilan belgilanadi. To'rtta plyus reaktsiyani baholaydi, bu probirkaning (soyabon) pastki qismini qoplaydigan yopishtirilgan eritrotsitlardan iborat yupqa plyonka shaklida bo'ladi, plyonkadagi bo'shliqlar bilan reaktsiya uchta plyus bilan belgilanadi, qirrali dantelli qirralari bo'lgan plyonka mavjudligi. yelimlangan eritrotsitlar soni ikkita plyus bilan ko'rsatiladi, eritrotsitlarning aglyutinatsiyalangan bo'laklar zonasi bilan o'ralgan eritrotsitlar cho'kindi cho'kindisi bitta plyusga to'g'ri keladi. Nazoratdan farq qilmaydigan keskin aniqlangan eritrotsit cho'kmasi aglutinatsiyaning yo'qligini ko'rsatadi. Titr sinov materialining chegaraviy suyultirilishi sifatida olinadi, bu eritrotsitlar aglutinatsiyasini ikkita plyus bilan keltirib chiqardi. RHA natijasi ijobiy bo'lsa, tadqiqot turiga xos sarumlar bilan HA RT yordamida ajratilgan virus turini aniqlash orqali davom ettiriladi. RTGA antiserumning virusli gemagglyutinatsiyani bostirish qobiliyatiga asoslanadi, chunki o'ziga xos antikorlar tomonidan neytrallangan virus qizil qon hujayralarini aglutinatsiya qilish qobiliyatini yo'qotadi. Viruslarni taxminiy tiplash uchun shishaga tushirish usuli qo'llaniladi. Izolyatsiya qilingan virusning turiga bog'liqligini yakuniy aniqlash va qon zardobidagi antikorlarni titrlash uchun kengaytirilgan RTHA probirkalarga yoki quduqlarga joylashtiriladi. Buning uchun fiziologik sho'r suvda zardobning ikki marta suyultirilishi tayyorlanadi va 0,25 ml ga quyiladi. Virusni o'z ichiga olgan materialning bir tomchisi va eritrotsitlarning 1% suspenziyasidan bir tomchi qon zardobini suyultirishga qo'shiladi. Virus turini aniqlash uchun RTGA dan foydalanilganda, AG ning ishchi suyultirilishining teng hajmiga qo'shiladigan turga xos sarumlar qo'llaniladi. Izolyatsiya qilingan virusning turiga bog'liqligi ushbu virusga antikorlarning eng yuqori titrini ko'rsatadigan o'ziga xos immun zardobi bilan belgilanadi. RGA va RTGA diagnostika uchun keng qo'llaniladi virusli infektsiyalar maxsus antikorlarni aniqlash va ularning antigenlari bo'yicha ko'plab viruslarni aniqlash uchun (mahalli ensefalit, gripp va boshqalar).

11621 0

Serologik reaktsiyalar turli xil xususiyatlarga ega bo'lgan komponentlarning o'zaro ta'sirida antigen-antikor kompleksining shakllanishi bilan birga keladigan hodisalarga muvofiq belgilanadi. Agglyutinatsiya, cho'kma va lizis reaktsiyalari mavjud.

Agglyutinatsiya reaktsiyasi (RA)

Agglyutinatsiya reaksiyasi (RA) korpuskulyar antigenni (bakteriyalarning suspenziyasi, sensibillashgan eritrotsitlar, lateks zarralari va boshqalar) ishlatishga asoslangan, buning natijasida hosil bo'lgan antigen-antikor kompleksi cho'kadi. Bu reaksiya bakterial infeksiyalarning serologik diagnostikasi va ajratilgan mikroorganizmlarni aniqlash uchun laboratoriya amaliyotida keng qo'llaniladi.

RA ko'plab yuqumli kasalliklarni tashxislash uchun ishlatiladi: brutselloz (Rayt, Heddleson reaktsiyasi), tulyaremiya, leptospiroz (RAL - leptospira aglutinatsiyasi va lizis reaktsiyasi), listerioz, tif (RAP - rikketsiya aglutinatsiya reaktsiyasi), shigellyoz, yersinioz, psevdoberkulyoz va boshqalar.

Bilvosita yoki passiv aglutinatsiya reaktsiyasi (RIGA yoki RPGA).

Ushbu reaktsiyani o'rnatish uchun hayvonlarning eritrotsitlari (qo'ylar, maymunlar, gvineya cho'chqalari, ba'zi qushlar) antikorlar yoki antigenlar bilan sensibilizatsiya qilinadi, bu eritrotsitlar suspenziyasi va antigen yoki immun zardob eritmasini inkubatsiya qilish orqali erishiladi.

Antigenlar bilan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar asosida olingan diagnostiklar deyiladi antijenik eritrotsitlar diagnostikasi. Ular qon zardobini ketma-ket suyultirishda antikorlarni aniqlash uchun mo'ljallangan, masalan, eritrotsitlar shigellozi diagnostikumlari, eritrotsitlar salmonellalari O-diagnostikumlari.

Shunga ko'ra, maxsus immunoglobulinlar bilan sezgir bo'lgan eritrotsitlarga asoslangan diagnostika deyiladi. antikor(immunoglobulin) diagnostika va ular turli materiallarda antigenlarni aniqlash uchun xizmat qiladi, masalan, burun va orofarenklardan material sepilganda suyuq ozuqa muhitida korinebakteriyalarning difteriya ekzotoksinini aniqlash uchun ishlatiladigan RIGA uchun eritrotsit immunoglobulin difteriya diagnostikum.

Gemagglyutinatsiya reaksiyasi bakterial (ich tifi, paratif, dizenteriya, brutsellyoz, vabo, vabo va boshqalar) va virusli (gripp, adenovirus infektsiyalari, qizamiq va boshqalar) infektsiyalarini aniqlash uchun ishlatiladi. RIGA RAga nisbatan sezuvchanlik va o'ziga xoslik bo'yicha ustundir.

Gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (HITA)

Gemagglyutinatsiyani inhibe qilish testi (HITA) qon zardobidagi antiviral antikorlarni titrlash, shuningdek, ajratilgan virusli madaniyatlarning bog'lanish turini aniqlash uchun ishlatiladi. RTHA patogenlari gemagglyutinatsiya qiluvchi xususiyatga ega bo'lgan virusli infektsiyalarni tashxislash uchun ishlatilishi mumkin.

Usulning printsipi shundaki, ma'lum turdagi virusga antikorlarni o'z ichiga olgan zardob uning gemagglyutinatsiya faolligini bostiradi va eritrotsitlar aglyutinlanmagan holda qoladi.

Passiv gemagglyutinatsiyani (RTPGA) inhibe qilish (kechikish) reaktsiyasi.

RTGAda uchta komponent ishtirok etadi: immun zardobi, antigen (sinov materiali) va sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar.

Agar sinov materialida immun standart zardobning antikorlari bilan maxsus reaksiyaga kirishadigan antigen bo'lsa, u ularni bog'laydi va keyinchalik qon zardobiga homolog bo'lgan antigen bilan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar qo'shilishi bilan gemagglyutinatsiya sodir bo'lmaydi.

RTPHA mikrobial antijenlarni aniqlash, ularning miqdorini aniqlash, shuningdek, TPHA ning o'ziga xosligini nazorat qilish uchun ishlatiladi.

Lateks aglutinatsiya reaktsiyasi (RLA)

Lateks zarralari antikorlar (immunoglobulinlar) tashuvchisi sifatida ishlatiladi. RLA - bu vaqtni (10 daqiqagacha) va test materialining kichik hajmida antigenni aniqlash qobiliyatini hisobga olgan holda yuqumli kasalliklarni tashxislashning ekspress usuli.

RLA miya omurilik suyuqligida Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae b tipi, Neisseria meningitidis antigenlarini ko'rsatish, tomoq surtmalarida A guruhi streptokokklarini aniqlash, salmonellyoz, yersinioz va boshqa kasalliklarni aniqlash uchun ishlatiladi. Usulning sezgirligi 1-10 ng/ml yoki 1 µl da 10³ -10⁶ bakteriya hujayralari.

Koagglyutinatsiya reaktsiyasi (RKoA)

Koagglyutinatsiya reaktsiyasi (RKoA) stafilokokklarning A oqsilining o'ziga xos immunoglobulinlarni biriktirish qobiliyatiga asoslanadi. RKA - ekspress diagnostika usuli - inson sirlarida va aylanma immun komplekslari (CIC) tarkibida eriydigan termostabil antijenlarni aniqlash uchun ishlatiladi. MSK tarkibida o'ziga xos antijenlarni aniqlash uchun ularni qon zardobidan oldindan cho'ktirish kerak.

yog'ingarchilik reaktsiyasi

Cho'kma reaktsiyasida (RP) antikorlarning yuqori dispersli eruvchan antijenler (oqsillar, polisaxaridlar) bilan o'zaro ta'siri natijasida komplement - cho'kmalar ishtirokida komplekslar hosil bo'ladi. Bu turli xil antijenler va antikorlarni aniqlash va tavsiflash uchun ishlatiladigan sezgir test. Yuqori sifatli RPning eng oddiy misoli - bu immun zardobda antigen qatlamlari chegarasida probirkada shaffof bo'lmagan yog'ingarchilik chizig'ining shakllanishi - halqali cho'kma reaktsiyasi. Yarim suyuqlikli agar yoki agaroz jellarida RPning har xil turlari keng qo'llaniladi (ikki tomonlama immunodiffuziya usuli, radial immunodiffuziya usuli, immunoelektroforez).

Komplement fiksatsiya reaktsiyasi (CFR)

Komplement fiksatsiya reaktsiyasi (CFR) komplement ishtirokidagi gemoliz hodisasiga asoslanadi, ya'ni. faqat komplementni biriktiruvchi antikorlarni aniqlay oladi.

RSC ko'plab bakterial va virusli infektsiyalarni, rikketsiozlarni, xlamidiyalarni tashxislash uchun keng qo'llaniladi. yuqumli mononuklyoz, protozoal infektsiyalar, gelmintozlar. RSC murakkab serologik reaktsiya bo'lib, unda ikkita tizim ishtirok etadi: antigen-antikor va komplement tizimi bilan ifodalangan test tizimi (qon zardobi) va gemolitik (qo'y eritrotsitlari + gemolitik sarum). Gemolitik zardob - qo'chqor eritrotsitlari bilan immunizatsiya qilingan quyonning issiqlik bilan faolsizlangan qon zardobi. U qo'y eritrotsitlariga qarshi antikorlarni o'z ichiga oladi.

RSKning ijobiy natijasi - gemolizning yo'qligi - agar test zardobida antigenga gomologik antikorlar mavjud bo'lsa, kuzatiladi. Bunda hosil bo'lgan antigen-antitel kompleksi komplementni bog'laydi va erkin komplement bo'lmaganda gemolitik tizimning qo'shilishi gemoliz bilan birga bo'lmaydi. Qon zardobida antigenga mos keladigan antikorlar bo'lmasa, antigen-antikor kompleksining shakllanishi sodir bo'lmaydi, komplement erkin qoladi va sarum eritrotsitlarning gemoliziga sabab bo'ladi, ya'ni. gemolizning mavjudligi reaktsiyaning salbiy natijasidir.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.

Gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi

Gemagglyutinatsiya reaktsiyasi

Agglyutinatsiya reaktsiyasi

Agglyutinatsiya reaktsiyasi (RA) - elektrolit (natriy xloridning izotonik eritmasi) ishtirokida antikorlar ta'sirida mikroblar yoki boshqa hujayralarning aglutinatsiyasi va cho'kishi. Olingan cho'kma deyiladi aglutinat.

Reaktsiya uchun sizga kerak bo'ladi:

1. Antikorlar (aglyutininlar) - bemorning qon zardobida yoki immun zardobida bo'ladi.

2. Antigen - tirik yoki o'ldirilgan mikroorganizmlar, eritrotsitlar yoki boshqa hujayralar suspenziyasi.

3. Izotonik eritma.

Serodiagnoz uchun aglyutinatsiya reaktsiyasi tif isitmasi, paratif isitmasi (Vidal reaktsiyasi), brutsellyoz (Rayt reaktsiyasi) va boshqalar uchun keng qo'llaniladi. Antikor bemorning zardobi, antigen esa ma'lum mikrobdir.

Mikroblar yoki boshqa hujayralar aniqlanganda, ularning suspenziyasi antijen bo'lib xizmat qiladi va ma'lum immun zardobi antikor bo'lib xizmat qiladi. Bu reaktsiya ichak infektsiyalari, ko'k yo'tal va boshqalarni tashxislashda keng qo'llaniladi.

Laboratoriya amaliyotida ikkita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RHA) qo'llaniladi, ular ta'sir mexanizmida farqlanadi.

Birinchi RGA serologiyaga ishora qiladi. Ushbu reaksiyada eritrotsitlar mos keladigan antikorlar (gemagglyutininlar) bilan o'zaro ta'sirlashganda aglutinatsiyalanadi. Reaktsiya qon guruhlarini aniqlash uchun keng qo'llaniladi.

Ikkinchi RGA serologik emas. Unda qizil qon hujayralarini yopishtirish antikorlar tomonidan emas, balki viruslar tomonidan yaratilgan maxsus moddalar tufayli yuzaga keladi. Masalan, gripp virusi tovuq va dengiz cho'chqalarining eritrotsitlarini, poliomielit virusi qo'ylarning eritrotsitlarini aglyutinatsiya qiladi. Ushbu reaktsiya sinov materialida ma'lum bir virus mavjudligini aniqlashga imkon beradi.

Bu serologik reaktsiya bo'lib, unda virus (antigen) bilan o'zaro ta'sir qiluvchi o'ziga xos antiviral antikorlar uni zararsizlantiradi va qizil qon hujayralarini aglutinatsiya qilish qobiliyatidan mahrum qiladi, ya'ni gemagglyutinatsiya reaktsiyasini inhibe qiladi. Gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasining (HITA) yuqori o'ziga xosligi uning yordamida HA paytida aniqlangan viruslarning turini va hatto turini aniqlashga imkon beradi.

Bilvosita (passiv) gemagglyutinatsiya (RIHA) reaktsiyasi eritrotsitlar, agar eruvchan antigen ularning yuzasida adsorbsiyalangan bo'lsa, adsorbsiyalangan antigenga antikorlar bilan o'zaro ta'sirlashganda aglutinatsiya qilish qobiliyatiga ega bo'lishiga asoslanadi. RNGA sxemasi rasmda ko'rsatilgan. RNHA bir qator infektsiyalarni tashxislashda keng qo'llaniladi.

Guruch. Passiv gemagglyutinatsiya (RPHA) reaktsiyasining sxemasi. A - eritrotsit diagnostikumini olish; B - RNGA: 1-eritrotsit: 2 - o'rganilgan antigen; 3 - eritrotsitlar diagnostikasi; 4 - o'rganilayotgan antigenga antikor: 5 - aglutinat.

RNHA yordamida, agar ma'lum antikorlar eritrotsitlarda adsorbsiyalangan bo'lsa, noma'lum antigenni aniqlash mumkin.

Bular reaktsiyalar chaqirdi bilvosita (passiv), chunki ular turli korpuskulyar zarrachalar yuzasida sun'iy ravishda so'rilgan Ag (yoki AT) dan foydalanadilar.

Bilvosita yoki passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RNGA, RPGA) eng sezgir serologik reaksiyalardan biridir. U AT ning bir vaqtning o'zida aglyutinatsiyalanadigan turli xil eritrotsitlarda fiksatsiyalangan Ag bilan o'zaro ta'sir qilish qobiliyatiga asoslangan. Diagnostiklarning ko'proq barqarorligi uchun eritrotsitlar rasmiylashtiriladi.

Teskari RNGA qon zardobida antijeni aniqlash uchun ishlatiladi; Buning uchun eritrotsitlarda Ag emas, balki AT fiksatsiyalanadi. Ushbu turdagi reaktsiyalar yuqumli kasalliklarni tashxislash, homiladorlikni aniqlash, dori vositalariga yuqori sezuvchanlikni aniqlash va boshqalar uchun keng qo'llaniladi.

Passiv gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (RTPGA) - keyingi rivojlanish RNGA; qaysidir ma'noda o'ziga xosligini boshqaradi. Undan farqli o'laroq RNGA, uchta komponentni o'z ichiga oladi; Ag, AT va Ag (AT) eritrotsitlarda adsorbsiyalanadi. Dastlab, Ag AT (standart antiserum) bilan reaksiyaga kirishadi, keyin aralashmaga bir xil Ag (yoki AT) bilan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar qo'shiladi. Agar Ag ning AT bilan o'zaro ta'sirida tizimda erkin AT (yoki Ag) qolmasa, eritrotsit diagnostikumining aglutinatsiyasi kuzatilmaydi.