Rga a hemaglutinačná inhibičná reakcia (hrga). Pasívne aglutinačné reakcie

Obsah predmetu "Imunomodulátory. Imunodiagnostika infekčných chorôb.":

Pasívne aglutinačné reakcie. Nepriame aglutinačné reakcie. Reakcia nepriamej alebo pasívnej hemaglutinácie (RNGA, RPGA). Reverzná RNGA. Reakcia pasívnej inhibície hemaglutinácie (RPHA).

Títo reakcie volal nepriamy (pasívny), keďže používajú Ag (alebo AT) umelo sorbované na povrchu rôznych korpuskulárnych častíc.

Reakcia nepriamej alebo pasívnej hemaglutinácie (RNGA, RPGA) je jednou z najcitlivejších sérologických reakcií. Je založená na schopnosti AT interagovať s Ag fixovaným na rôznych erytrocytoch, ktoré zároveň aglutinujú. Pre väčšiu stabilitu diagnostiky sú erytrocyty formalizované.

Reverzná RNGA používa sa na detekciu antigénu v krvnom sére; na to nie sú na erytrocyty fixované Ag, ale AT. Reakcie tohto typu sú široko používané na diagnostiku infekčných chorôb, stanovenie tehotenstva, detekciu precitlivenosti na lieky atď.

Reakcia pasívnej inhibície hemaglutinácie (RTPGA) - ďalší vývoj RNGA; v určitom zmysle riadi jeho špecifickosť. Na rozdiel od RNGA obsahuje tri zložky; Ag, AT a Ag (AT) adsorbované na erytrocytoch. Najprv Ag reaguje s AT (štandardné antisérum), potom sa do zmesi pridajú erytrocyty senzibilizované rovnakým Ag (alebo AT). Ak počas interakcie Ag s AT nezostane v systéme voľný AT (alebo Ag), potom nie je pozorovaná aglutinácia erytrocytového diagnostica.

Obsah predmetu "Imunomodulátory. Imunodiagnostika infekčných chorôb.":

Predĺžená aglutinačná reakcia (RA). Na stanovenie AT v krvnom sére pacienta vložte rozšírená aglutinačná reakcia (RA). Na tento účel sa do série riedení krvného séra pridáva diagnostikum - suspenzia usmrtených mikroorganizmov alebo častíc s adsorbovaným Ag. Maximálne riedenie aglutinácia Ag, nazývaný titer krvného séra.

Odrody aglutinačnej reakcie (RA) na zistenie AT - kvapkový test na tularémiu (s aplikáciou diagnostika na kvapku krvi a objavením sa viditeľných belavých aglutinátov) a Huddlesonovej reakcie na brucelózu (s diagnostikom zafarbeným genciánovou violeťou aplikovanou na kvapku krvného séra).

Približná aglutinačná reakcia (RA)

Na identifikáciu izolovaných mikroorganizmov sa na podložné sklíčka umiestni približná RA. Za týmto účelom sa kultúra patogénu pridá do kvapky štandardného diagnostického antiséra (v riedení 1:10, 1:20). O pozitívny výsledok dať podrobnú reakciu so zvyšujúcim sa riedením antiséra.

reakciu za pozitívne, ak sa aglutinácia pozoruje v riedeniach blízkych titru diagnostického séra.

OAS. Somatické O-Ag sú tepelne stabilné a odolávajú varu 2 h.. Pri interakcii s AT tvoria jemnozrnné agregáty.

N-Ag. H-Ag (bičíkatý) termolabilné a rýchlo zničené pri 100 °C, ako aj pôsobením etanolu. Pri reakciách s H-antisérom sa po 2 hodinách inkubácie vytvoria voľné veľké vločky (vytvorené baktériami, ktoré sa zlepia s bičíkmi).

Vi Ar baktérie týfusu sú relatívne termostabilné (odoláva teplote 60-62 ° C počas 2 hodín); pri inkubácii s Vi-antisérom vzniká jemnozrnný aglutinát.

Priame hemaglutinačné reakcie

Najjednoduchšie z nich reakcie - aglutinácia erytrocyty, alebo hemaglutinácia, používané na stanovenie krvných skupín v systéme AB0. Na určenie aglutinácia(alebo jeho absencia) sa používajú štandardné antiséra s anti-A a anti-B aglutinínmi. Reakcia sa nazýva priama, pretože študované antigény sú prirodzenými zložkami erytrocytov.

Zdieľané s priama hemaglutinácia mechanizmov má vírusovú hemaglutináciu. Mnohé vírusy sú schopné spontánne aglutinovať vtáčie a cicavčie erytrocyty a ich pridanie do suspenzie erytrocytov spôsobuje tvorbu agregátov z nich.

Aglutinačné reakcie založené na interakcii činidla (protilátok) s antigénmi umiestnenými na povrchu buniek alebo cudzích častíc. V dôsledku toho vznikajú agregáty veľkých rozmerov, ktoré sa vyzrážajú a sú viditeľné aj voľným okom. Krvná skupina sa teda určuje podľa systému ABO, prítomnosti Rh faktora v ňom atď. Ide o citlivejšiu diagnostickú metódu v porovnaní so zrážacími reakciami, keďže objem sedimentu (aglutinátu) prevyšuje objem zrazeniny.

Priama hemaglutinácia

Priamy hemaglutinačný test (RPHA) sa používa na detekciu povrchových antigénov mikroorganizmov a erytrocytov, ako aj protilátok proti nim.
Testovaný materiál (krv) sa pridá do štandardného séra obsahujúceho protilátky. Rýchlosť priamej aglutinačnej reakcie súvisí s množstvom testovaného materiálu, množstvom a koncentráciou séra a teplotou okolia.

Nepriama hemaglutinácia

Reakcia nepriamej hemaglutinácie sa uskutočňuje na detekciu protilátok v krvi pacienta pomocou erytrocytárneho diagnostického zariadenia. Činidlom sú erytrocyty, na povrchu ktorých sa nachádza antigén (proteíny mikroorganizmov, toxíny, alergény atď.).
Krvné sérum pacienta sa zriedi 0,9% roztokom chloridu sodného, ​​potom sa pridá erytrocytárne diagnosticum a sleduje sa výsledok. Táto vysoko citlivá diagnostická metóda deteguje antigény už pri nízkych koncentráciách.

Reakcia inhibície hemaglutinácie

Hemaglutinačná reakcia

Aglutinačná reakcia

Aglutinačná reakcia (RA) je aglutinácia a precipitácia mikróbov alebo iných buniek pôsobením protilátok v prítomnosti elektrolytu (izotonický roztok chloridu sodného). Vzniknutá zrazenina sa nazýva aglutinovať.

Pre reakciu potrebujete:

1. Protilátky (aglutiníny) – sú v sére pacienta alebo v imunitnom sére.

2. Antigén – suspenzia živých alebo usmrtených mikroorganizmov, erytrocytov alebo iných buniek.

3. Izotonický roztok.

Aglutinačná reakcia na sérodiagnostiku je široko používaná pre brušný týfus, paratýfus (Vidalova reakcia), brucelózu (Wrightova reakcia) atď. sérum pacienta a antigén je známy mikrób.

Keď sú identifikované mikróby alebo iné bunky, ich suspenzia slúži ako antigén a známe imunitné sérum slúži ako protilátka. Táto reakcia je široko používaná v diagnostike črevné infekcie, čierny kašeľ a pod.

V laboratórnej praxi sa využívajú dve hemaglutinačné reakcie (RHA), ktoré sa líšia mechanizmom účinku.

Prvé RGA odkazuje na sérológiu. Pri tejto reakcii dochádza k aglutinácii erytrocytov pri interakcii so zodpovedajúcimi protilátkami (hemaglutiníny). Reakcia sa široko používa na stanovenie krvných skupín.

Druhé RGA nie je sérologický. V ňom je lepenie červených krviniek spôsobené nie protilátkami, ale špeciálnymi látkami tvorenými vírusmi. Napríklad vírus chrípky aglutinuje erytrocyty kurčiat a morčiat, vírus detskej obrny aglutinuje erytrocyty oviec. Táto reakcia umožňuje posúdiť prítomnosť konkrétneho vírusu v testovanom materiáli.

Ide o sérologickú reakciu, pri ktorej špecifické antivírusové protilátky interagujúce s vírusom (antigénom) ho neutralizujú a zbavujú ho schopnosti aglutinovať červené krvinky, t.j. inhibovať hemaglutinačnú reakciu. Vysoká špecifickosť hemaglutinačnej inhibičnej reakcie (HITA) umožňuje jej použitie na určenie typu a dokonca aj typu vírusov detekovaných počas HA.

Reakcia nepriamej (pasívnej) hemaglutinácie (RIHA) je založená na skutočnosti, že erytrocyty, ak je na ich povrchu adsorbovaný rozpustný antigén, získavajú schopnosť aglutinácie pri interakcii s protilátkami proti adsorbovanému antigénu. Schéma RNGA je znázornená na obr. RNHA sa široko používa pri diagnostike mnohých infekcií.

Ryža. Schéma reakcie pasívnej hemaglutinácie (RPHA). A - získanie diagnostiky erytrocytov; B - RNGA: 1-erytrocyt: 2 - študovaný antigén; 3 - diagnostika erytrocytov; 4 - protilátka na študovaný antigén: 5 - aglutinát.

Pomocou RNHA možno určiť neznámy antigén, ak sú na erytrocytoch adsorbované známe protilátky.

11621 0

Sérologické reakcie sa označujú v súlade s javmi sprevádzajúcimi tvorbu komplexu antigén-protilátka počas interakcie zložiek s rôznymi vlastnosťami. Existujú reakcie aglutinácie, precipitácie a lýzy.

Aglutinačná reakcia (RA)

Aglutinačná reakcia (RA) je založená na použití korpuskulárneho antigénu (suspenzia baktérií, senzibilizovaných erytrocytov, latexových častíc a pod.) interagujúceho so špecifickými protilátkami, v dôsledku čoho sa vyzráža výsledný komplex antigén-protilátka. Táto reakcia je široko používaná v laboratórnej praxi pre sérologickej diagnózy bakteriálnych infekcií a na identifikáciu izolovaných mikroorganizmov.

RA sa používa na diagnostiku mnohých infekčných ochorení: brucelóza (Wright, Heddlesonova reakcia), tularémia, leptospiróza (RAL - leptospira aglutination and lysis reaction), listerióza, týfus (RAP - rickettsia aglutination response), shigelóza, yersinióza, pseudotuberkulóza atď.

Reakcia nepriamej alebo pasívnej aglutinácie (RIGA alebo RPGA).

Na nastavenie tejto reakcie sa používajú erytrocyty zvierat (ovce, opice, morčatá, niektoré vtáky) senzibilizované protilátkami alebo antigénom, čo sa dosiahne inkubáciou suspenzie erytrocytov a roztoku antigénu alebo imunitného séra.

Diagnostika získaná na základe erytrocytov senzibilizovaných antigénmi sa nazývajú antigénna diagnostika erytrocytov. Sú určené na detekciu protilátok v sériových riedeniach krvných sér, ako sú erytrocytové shigellosis diagnosticums, erytrocytové salmonely O-diagnosticum.

V súlade s tým sa nazývajú diagnostické metódy založené na erytrocytoch senzibilizovaných špecifickými imunoglobulínmi protilátka(imunoglobulín) diagnostika a slúžia na detekciu antigénov v rôznom materiáli, napr. erytrocytový imunoglobulínový difterický diagnosticum pre RIGA, používaný na detekciu difterického exotoxínu korynebaktérií v tekutom živnom médiu, keď sa doň naočkuje materiál z nosa a orofaryngu.

Hemaglutinačná reakcia sa používa na diagnostiku bakteriálnych (týfus, paratýfus, úplavica, brucelóza, mor, cholera a pod.) aj vírusových (chrípka, adenovírusové infekcie, osýpky atď.) infekcií. RIGA je lepšia v citlivosti a špecifickosti voči RA.

Hemaglutinačná inhibičná reakcia (HITA)

Hemaglutinačný inhibičný test (HITA) sa používa na titráciu antivírusových protilátok v krvnom sére, ako aj na stanovenie typu afiliácie izolovaných vírusových kultúr. RTGA sa môže použiť na ich diagnostiku vírusové infekcie, ktorých pôvodcovia majú hemaglutinačné vlastnosti.

Princíp metódy spočíva v tom, že sérum obsahujúce protilátky proti špecifickému typu vírusu potláča jeho hemaglutinačnú aktivitu a erytrocyty zostávajú neaglutinované.

Reakcia inhibície (oneskorenie) pasívnej hemaglutinácie (RTPGA).

V RTGA sa podieľajú tri zložky: imunitné sérum, antigén (testovaný materiál) a senzibilizované erytrocyty.

Ak testovaný materiál obsahuje antigén, ktorý špecificky reaguje s protilátkami imunitného štandardného séra, potom ich naviaže a následným pridaním erytrocytov senzibilizovaných antigénom homológnym so sérom k hemaglutinácii nedochádza.

RTPHA sa používa na detekciu mikrobiálnych antigénov, na ich kvantifikáciu a tiež na kontrolu špecifickosti TPHA.

Latexová aglutinačná reakcia (RLA)

Latexové častice sa používajú ako nosiče protilátok (imunoglobulínov). RLA je expresná metóda na diagnostiku infekčných ochorení, berúc do úvahy čas, ktorý to trvá (do 10 minút) a schopnosť detegovať antigén v malom objeme testovaného materiálu.

RLA sa používa na indikáciu antigénov Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae typu b, Neisseria meningitidis v mozgovomiechovom moku, na detekciu streptokokov skupiny A vo výteroch z hrdla, na diagnostiku salmonelózy, yersiniózy a iných ochorení. Citlivosť metódy je 1-10 ng/ml, alebo 10³-10⁶ bakteriálnych buniek v 1 µl.

Koaglutinačná reakcia (RKoA)

Koaglutinačná reakcia (RKoA) je založená na schopnosti proteínu A stafylokokov pripájať špecifické imunoglobulíny. RKA - metóda expresnej diagnostiky - sa používa na identifikáciu rozpustných termostabilných antigénov v ľudských tajomstvách a v zložení cirkulujúcich imunitných komplexov (CIC). Detekcia špecifických antigénov v zložení CEC vyžaduje ich predbežné vyzrážanie z krvného séra.

zrážacia reakcia

Pri precipitačnej reakcii (RP) v dôsledku interakcie protilátok s vysoko disperznými rozpustnými antigénmi (proteíny, polysacharidy) vznikajú za účasti komplementu - precipitáty komplexy. Je to citlivý test používaný na detekciu a charakterizáciu rôznych antigénov a protilátok. Najjednoduchším príkladom kvalitného RP je vytvorenie nepriehľadného precipitačného pásu v skúmavke na hranici vrstvy antigénu na imunitnom sére – prstencová precipitačná reakcia. Rôzne typy RP sú široko používané v polotekutom agare alebo agarózových géloch (dvojitá imunodifúzna metóda, radiálna imunodifúzna metóda, imunoelektroforéza).

Reakcia fixácie komplementu (CFR)

Reakcia fixácie komplementu (CFR) je založená na fenoméne hemolýzy zahŕňajúcej komplement, t.j. dokáže detegovať len protilátky fixujúce komplement.

RSC sa široko používa na diagnostiku mnohých bakteriálnych a vírusových infekcií, rickettsiózy, chlamýdií, infekčná mononukleóza, protozoálne infekcie, helmintiázy. RSC je komplexná sérologická reakcia, na ktorej sa podieľajú dva systémy: testovací systém (krvné sérum), reprezentovaný systémom antigén-protilátka a komplement, a hemolytický (ovčie erytrocyty + hemolytické sérum). Hemolytické sérum je teplom inaktivované krvné sérum králika imunizovaného baraními erytrocytmi. Obsahuje protilátky proti ovčím erytrocytom.

Pozitívny výsledok RSK - absencia hemolýzy - sa pozoruje, ak testovacie sérum obsahuje protilátky homológne s antigénom. V tomto prípade výsledný komplex antigén-protilátka viaže komplement a pri absencii voľného komplementu nie je pridanie hemolytického systému sprevádzané hemolýzou. Pri nedostatku protilátok zodpovedajúcich antigénu v sére nedochádza k tvorbe komplexu antigén-protilátka, komplement zostáva voľný a sérum spôsobuje hemolýzu erytrocytov, t.j. prítomnosť hemolýzy je negatívny výsledok reakcie.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.